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比色分析的基本原理(朗伯-比爾定律,吸光度,消光度,吸光系數(shù))

( 關(guān)鍵詞:比色分析,吸光光度法,光電比色法,分光光度法,朗伯-比爾定律,吸光度,消光度,吸光系數(shù) )

比色分析是基于溶液對光的選擇性吸收而建立起來的一種分析方法,又稱吸光光度法。

  有色物質(zhì)溶液的顏色與其濃度有關(guān)。溶液的濃度越大,顏色越深。利用光學(xué)比較溶液顏色的深度,可以測定溶液的濃度。

  根據(jù)吸收光的波長范圍不同以及所使用的儀器精密程度,可分為光電比色法和分光光度法等。

  比色分析具有簡單、快速、靈敏度高等特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于微量組分的測定。通常中測定含量在10-1~10-4mg·L-1的痕量組分。比色分析如同其他儀器分析一樣,也具有相對誤差較大(一般為1%~5%)的缺點(diǎn)。但對于微量組分測定來說,由于絕對誤差很小,測定結(jié)果也是令人滿意的。在現(xiàn)代儀器分析中,有60%左右采用或部分采用了這種分析方法。在醫(yī)學(xué)學(xué)科中,比色分析也被廣泛應(yīng)用于藥物分析、衛(wèi)生分析、生化分析等方面。

  一、物質(zhì)的顏色和光的關(guān)系

  光是一種電磁波。自然是由不同波長(400~700nm)的電磁波按一定比例組成的混合光,通過棱鏡可分解成紅、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫等各種顏色相連續(xù)的可見光譜。如把兩種光以適當(dāng)比例混合而產(chǎn)生白光感覺時,則這兩種光的顏色互為補(bǔ)色。圖8-1中處于同一直線關(guān)系的兩種色光(如綠與紫、黃與藍(lán))互為補(bǔ)色。

  當(dāng)白光通過溶液時,如果溶液對各種波長的光都不吸收,溶液就沒有顏色。如果溶液吸收了其中一部分波長的光,則溶液就蜈現(xiàn)透過溶液后剩余部分光的顏色。例如,我們看到KMnO4溶液在白光下呈紫紅色,就是因?yàn)榘坠馔高^溶液時,綠色光大部分被吸收,而其他各色都能透過。在透過的光中除紫紅色外都能兩兩互補(bǔ)成白色,所以KMnO4溶液呈現(xiàn)紫紅色。醫(yī)學(xué)全.在線網(wǎng).站.提供

  同理,CuSO4溶液能吸收黃色光,所以溶液呈藍(lán)色。由此可見,有色溶液的顏色是被吸收光顏色的補(bǔ)色。吸收越多,則補(bǔ)色的顏色越深。比較溶液顏色的深度,實(shí)質(zhì)上就是比較溶液對它所吸收光的吸收程度。表8-1列出了溶液的顏色與吸收光顏色的關(guān)系。

表8-1 溶液的顏色與吸收光顏色的關(guān)系

溶液顏色 紫紅 藍(lán) 青藍(lán)
吸收光 顏色 藍(lán) 青藍(lán) 青綠
波長/nm 400~450 450~480 480~490 490~500 500~560 560~580 580~600 600~650 650~760

  二、朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律

  當(dāng)一束平行單色光(只有一種波長的光)照射有色溶液時,光的一部分被吸收,一部分透過溶液(圖8-2)。

圖8-2 光吸收示意圖

  設(shè)入射光的強(qiáng)度為I0,溶液的濃度為c,液層的厚度為b,透射光強(qiáng)度為I,則

  (8-1)

  式中l(wèi)gI0/i 表示光線透過溶液時被吸收的程度,一般稱為吸光度(A)或消光度(E)。因此,上式又可寫為:

  A=Kcb(8-2)

  上式為朗伯-比爾定律的數(shù)學(xué)表示式。它表示一束單色光通過溶液時,溶液的吸光度與溶液的濃度和液層厚度的乘積成正比。

  式中,K為吸光系數(shù),當(dāng)溶液濃度c和液層厚度b的數(shù)值均為1時,A=K,即吸光系數(shù)在數(shù)值上等于c和b均為1時溶液的吸光度。對于同一物質(zhì)和一定波長的入射光而言,它是一個常數(shù)。

  比色法中常把稱為透光度,用T表示,透光度和吸光度的關(guān)

  系如下:

   (8-3)

  當(dāng)c以mol·L-1為單位時,吸光系數(shù)稱為摩爾吸光系數(shù),用ε表示,其單位是L·mol-1·cm-1。當(dāng)c以質(zhì)量體積濃度(g·ml-1)表示時,吸光系數(shù)稱為百分吸光系數(shù),用E1%1cm表示,單位是ml·g-1·cm-1。吸光系數(shù)越大,表示溶液對入射光越容易吸收,當(dāng)c有微小變化時就可使A有較大的改變,故測定的靈敏度較高。一般ε值在103以上即可進(jìn)行比色分析。

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