作者單位：深圳市橫崗人民醫(yī)院，廣東 深圳 518115
【摘要】 目的：探討慢性乙型肝炎患者外周血Th細胞凋亡信號蛋白的表達情況及臨床意義。方法：提取35例慢性乙型肝炎患者和35例健康人外周血單核細胞，應用流式細胞術(shù)分析慢性乙型肝炎患者外周血Th細胞凋亡信號蛋白Fas、FasL和Bcl2表達情況。結(jié)果：慢性乙肝患者Th細胞Fas、FasL表達明顯高于健康對照組（P<0.05)，但Bcl2表達在兩組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05)。結(jié)論：外周血Th細胞凋亡異�？赡芘c慢性乙型肝炎患者細胞免疫效應低下及疾病發(fā)展相關(guān)。
【關(guān)鍵詞】 慢性乙型肝炎；輔助性T細胞；凋亡蛋白
Analysis and clinical significance of expression of apoptotic related proteins on peripheral blood Th cell in chronic hepatitis B patients
LUO Zujun,LI Yanhua
The People’s Hospital of Henggang,Shenzhen，Guangdong 518115，China
Abstract： Objective To explore the expression of apoptotic related protein on peripheral blood Th cells in chronic hepatitis B and evaluate its clinical significance. Methods Peripheral blood monocytes were separated from 35 healthy persons and 35 patients with chronic hepatitis B and its apoptotic related proteins Fas, FasL and Bcl2 were detected by FCM. Results The expression of Fas, FasL on Th in chronic hepatitis B patients is higher than that on healthy controls（P<0.05), while the difference of Bcl2 between patients and controls is no statistic significance（P>0.05).Conclusion The high expression of apoptotic related protein Fas, FasL on Th in chronic hepatitis B patients enhances the apoptosis of Th cells,which leads to lower cell immunity function and negative progress of patients.
Key words： Chronic hepatitis B; Th cell; Apoptosis proteins
乙型肝炎是一種免疫相關(guān)性疾病，HBV感染機體后并不直接對肝細胞造成損傷，是通過誘發(fā)機體免疫效應間接損傷肝細胞。同時，乙肝病毒得以清除，這種免疫反應要是通過淋巴細胞亞群的改變，CD4+T細胞數(shù)量和功能的改變是其中重要的環(huán)節(jié)［1］。本文通過檢測慢性乙肝患者CD4+T細胞凋亡相關(guān)蛋白表達情況，探討慢性乙肝患者細胞免疫功能狀態(tài)，分析它們在慢性HBV發(fā)病中的臨床意義。
1 資料與方法
1.1 病例資料
35例慢性乙型肝炎均為我院2006年7月至2007年5月間收治的患者，年齡18歲～62歲，平均年齡42歲，其中男性18例，女性17例。根據(jù)2000年第十次全國病毒性肝炎會議標準診斷［2］。對照組為健康人，年齡17歲～65歲，平均年齡43歲，其中男性20例，女性15例。
1.2 主要試劑及儀器
淋巴細胞分離液購于AXISSHIED公司、流式細胞儀為Beckman EPICSXL型，PECD4抗體購自BD公司,FasFITC、FasLFITC和 Bcl2FITC抗體 購自Santa Cruz公司。
1.3 方法
無菌采集患者和健康人外周靜脈血5 ml，肝素抗凝，以淋巴細胞分離液分離得淋巴細胞，溶血素溶解細胞，經(jīng)T細胞分離富聚柱得純化的T細胞，然后用PBS洗滌并調(diào)整至1×106/ ml，分別加入FasFITC/CD4PE, FasLFITC/CD4PE和Bcl2FITC/CD4PE兩組單抗，放置30 min后，上流式細胞儀，分析每管10 000個細胞，小鼠抗人單克隆IgG1FITC作為陰性對照管，得出Fas、 FasL和Bcl2蛋白表達的百分率。
1.4 統(tǒng)計學處理
全部數(shù)據(jù)均經(jīng)SPSS10.0統(tǒng)計學軟件分析，計算各組均數(shù)和標準差，用±s表示，組間差異用t檢驗分析。
2 結(jié)果
由下表可見，慢性乙型肝炎CD4+T細胞Fas、FasL與健康對照組相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05)，而慢性乙型肝炎患者CD4+T細胞Bcl2表達與健康對照組差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05)。表1 慢性乙型肝炎患者Th細胞Fas、FasL和Bcl2表達情況（略)注：與健康對照比較*P＜0.05;△P＞0.05。
3 討論
慢性乙型肝炎是臨床常見病，目前認為其與宿主機體免疫狀態(tài)特別是細胞免疫功能失調(diào)密切相關(guān)［3］。CD4+T細胞主要代表輔助性T細胞(Th細胞),它對B細胞、細胞毒性T細胞（CTL)及其他免疫細胞的增殖和分化具有促進作用。有研究表明，慢性乙肝患者外周血CD4+T細胞絕對數(shù)和相對數(shù)（CD4+/CD8+)都明顯降低［4］，這意味著CD4+T數(shù)量和質(zhì)量的異常在慢性乙型肝炎進展中起重要的作用。www.med126.comFasL是表達于活化免疫細胞的膜分子，它與相應受體結(jié)合，通過FasFasL信號途徑可介導細胞凋亡，而Bcl2是體內(nèi)重要的抗凋亡蛋白分子，能阻斷凋亡信號傳遞的最后通路而抑制凋亡。所以，這兩種凋亡蛋白表達在一定程度上調(diào)節(jié)體內(nèi)CD4+T細胞的數(shù)量和功能，但是該蛋白在慢性HBV患者體內(nèi)的表達情況尚未完全明確。
我們研究結(jié)果顯示慢性乙肝患者CD4+T細胞表面Fas、FasL的表達顯著高于健康人群，而Bcl2在兩組間差異無顯著性。這可能是由于乙肝患者體內(nèi)活化的CD4+T細胞增多，細胞免疫活性上調(diào)，但免疫效應的結(jié)果是在清除病毒感染的同時，通過FasFasL途徑誘導Th細胞凋亡，也就是活化誘導凋亡（AICD)方式，促使患者免疫調(diào)節(jié)失衡，細胞免疫紊亂，這或許是慢性乙肝患者CD4+T細胞數(shù)量下降的潛在機制。
FasL是T細胞活化的標志之一，因此Th細胞表面FasL的表達可能與慢性HBV的病情密切相關(guān)。在慢性HBV患者外周血CD4+T細胞表面FasL表達量和細胞數(shù)量結(jié)合起來可能有如下幾點臨床意義：細胞數(shù)量正常，F(xiàn)asL表達量上升表明機體針對乙肝病毒免疫力增強，病情較輕；細胞數(shù)量下降而FasL表達量增加，表明機體免疫系統(tǒng)在對乙肝病毒實行細胞免疫同時，引起自身凋亡，導致效應細胞數(shù)量減少；細胞數(shù)量和FasL表達量均下降，說明效應細胞數(shù)減少且細胞免疫功能低下，病情有可能惡化［5］。
因此，我們可以通過檢測慢性HBV患者外周血CD4+T細胞的數(shù)量及其凋亡相關(guān)蛋白Fas/FasL的表達來預測病情的發(fā)展，為臨床診斷與治療提供實驗依據(jù)。
【參考文獻】
�。�1］Maini MK, Boni C, Lee CK, et al.The role of virusspecific CD8+cells in liver damage and viral control during persistent hepatitis B virus infection［J］.J EXP Med,2000,191:12691280.
�。�2］中華醫(yī)學會傳染病與寄生蟲病學分會、肝病學分會.病毒學肝炎防治方案［J］.肝臟,2000,5:257263.
�。�3］王敏,王福生,劉敬超.慢性乙型肝炎患者外周血淋巴細胞亞群與病程相關(guān)性研究［J］.肝臟,2003,8:1820.
�。�4］杜美華,高濤,王介非，等.從淋巴細胞亞群絕對值探討慢性乙型肝炎細胞免疫［J］.肝臟,2006,8:260261.
�。�5］俎燕會，陳士俊.慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴細胞凋亡變化及其意義［J］.山東醫(yī)藥,2006,46(11):7475.
