綜合性實(shí)驗(yàn)三空氣、水與人體體表細(xì)菌學(xué)檢查
空氣、污水、人體皮膚及與外界相通的腔道均有大量細(xì)菌存在，且種類(lèi)繁多，這些微生物往
往是實(shí)驗(yàn)室中各種實(shí)驗(yàn)材料、實(shí)驗(yàn)菌種污染的禍根，是引起各種感染性疾病的禍根。根據(jù)細(xì)
菌生
長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)條件和細(xì)菌對(duì)染料的著色情況取樣培養(yǎng)檢查，即可觀察到人類(lèi)生活環(huán)境的各種
細(xì)菌。通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)室或醫(yī)院內(nèi)空氣、水和人體體表的細(xì)菌檢查，我們可了解人體的帶菌環(huán)
境，
增強(qiáng)對(duì)傳染病的認(rèn)識(shí)，樹(shù)立“處處藥品數(shù)據(jù)有菌”和嚴(yán)格的消毒與滅菌觀念，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中嚴(yán)格執(zhí)行
無(wú)菌操作。
醫(yī)院作為一個(gè)特殊的環(huán)境，病原體種類(lèi)繁多、來(lái)源廣泛；很多細(xì)菌呈高度的耐藥性，病人又
往往存在一些易感因素。因此，病原體容易通過(guò)空氣傳播和接觸傳播等，侵入機(jī)體引起醫(yī)院
內(nèi)感染(Nosocomial infections,Hospital infections)，又稱(chēng)醫(yī)院獲得性感染(Hospital a
cquired infections)。醫(yī)院內(nèi)環(huán)境監(jiān)測(cè)主要是通過(guò)細(xì)菌培養(yǎng)的方法，觀察空氣
各種醫(yī)學(xué)全.在線bhskgw.cn物體
表面，以及人體體表的細(xì)菌總數(shù)、細(xì)菌種類(lèi)及其動(dòng)態(tài)變化，以便有的放矢采取措施，控制和
降低醫(yī)院內(nèi)感染的發(fā)病率；另外，當(dāng)發(fā)生醫(yī)院內(nèi)感染暴發(fā)流行時(shí)，通過(guò)環(huán)境微生物檢查，可
及時(shí)發(fā)現(xiàn)傳染源和傳播途徑。因此，環(huán)境監(jiān)測(cè)是醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)的一個(gè)組成部分。
一空氣的細(xì)菌學(xué)檢查
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>
1了解實(shí)驗(yàn)室和醫(yī)院空氣的有菌環(huán)境，加強(qiáng)消毒、滅菌的觀念。
2熟悉醫(yī)院病房空氣的細(xì)菌監(jiān)測(cè)方法。
3掌握空氣的衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢測(cè)指標(biāo)及意義。
【實(shí)驗(yàn)原理】
空氣是一種重要的疾病傳播媒介。在醫(yī)院，病人的排泄物和分泌物，如飛沫、痰液、膿汁和
糞便等攜帶大量的微生物，可嚴(yán)重污染空氣。某些醫(yī)療操作也會(huì)造成空氣污染，如高速牙鉆
修補(bǔ)或超聲波清潔牙齒，鋪床、清掃及人員走動(dòng)等也是醫(yī)院空氣微生物的來(lái)源。因此，應(yīng)
對(duì)空氣進(jìn)行經(jīng)常性的衛(wèi)生監(jiān)督，檢查空氣中病原菌較困難，故以經(jīng)常存在于口腔
和鼻腔的鏈球菌作為空氣衛(wèi)生的指標(biāo)，根據(jù)空氣中鏈球菌多少以及空氣中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定
來(lái)判斷空氣衛(wèi)生狀況、污染程度。
通常采用沉降法檢測(cè)細(xì)菌總數(shù)。沉降法是以微生物在空氣中能隨塵粒下沉的原理，將平板平
放在空氣中暴露一定時(shí)間，使空氣中的細(xì)菌直接沉降至培養(yǎng)基表面，然后置37℃孵育24小時(shí)
，計(jì)算菌落數(shù)。按下列公式可得出空氣中細(xì)菌總數(shù)。
每立方米細(xì)菌數(shù)=50，000N〖〗AT
A：所用平板面積(平方厘米)；T：平板暴露于空氣中的時(shí)間(分鐘為單位)；
N：平板上的細(xì)菌菌落數(shù)。
【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法】
一空氣中細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定
1取普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板10個(gè)(直徑9cm)，在皿底做上記號(hào)。
2選擇同一房間的5個(gè)不同的采樣地點(diǎn)，將平板蓋打開(kāi)，平板蓋朝下放置在平板旁，分別暴
露于空氣中10分鐘、30分鐘，然后蓋好。注明地點(diǎn)、暴露時(shí)間。
3平板置37℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí)后取出觀察，計(jì)算出所生長(zhǎng)的菌落數(shù)，并比較菌落數(shù)量與暴
露時(shí)間長(zhǎng)短、不同地點(diǎn)的關(guān)系。
【注意事項(xiàng)】
●因室內(nèi)空氣中細(xì)菌的分布不勻，須在室中央及周角各置一平皿，分別計(jì)數(shù)后求其平均值。
二空氣中鏈球菌檢查法
一般可用血平板作沉降法檢查。經(jīng)培養(yǎng)后，計(jì)算培養(yǎng)基上溶血性鏈球菌和草綠色鏈球菌的菌
落數(shù)，并經(jīng)涂片染色鏡檢證實(shí)。
附表：
醫(yī)院各類(lèi)房間空氣中細(xì)菌總數(shù)要求
細(xì)菌數(shù)分級(jí)〖〗細(xì)菌總數(shù)/M3〖〗病房類(lèi)型
最低細(xì)菌數(shù)〖〗＜10〖〗器官移植、心血管手術(shù)室、制劑室
低細(xì)菌數(shù)〖〗＜200〖〗無(wú)菌室或其他手術(shù)室、嬰兒室、產(chǎn)房、術(shù)后恢復(fù)室、供應(yīng)室、中
心滅菌室
一般細(xì)菌數(shù)〖〗200～500〖〗普通病房、治療室、放射科、按摩室
注：以上為世界衛(wèi)生組織建議標(biāo)準(zhǔn)，我國(guó)衛(wèi)生部要求，手術(shù)室、產(chǎn)房及嬰兒室空氣中細(xì)
菌總數(shù)不得超過(guò)500個(gè)/M3。
【問(wèn)題】
①在微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，怎樣才能避免雜菌的污染?
②為何取鏈球菌作為空氣的衛(wèi)生指標(biāo)之一?
③空氣的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定如何?你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明了什么問(wèn)題?
二水的衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢查
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>
1掌握水的衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢測(cè)指標(biāo)及意義。
2熟悉水的細(xì)菌總數(shù)及大腸菌群數(shù)的檢測(cè)方法。
【實(shí)驗(yàn)原理】
水的衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)有兩方面的意義，一是從衛(wèi)生學(xué)角度對(duì)水質(zhì)、水源提供有關(guān)資料，二是
結(jié)合流行病調(diào)查檢查由水源傳播的某些傳染病病原菌，為其防治提供證據(jù)和對(duì)策。在實(shí)際工
作中，由于病原菌往往不是水中生長(zhǎng)的優(yōu)勢(shì)菌，難以檢測(cè)，所以一般選擇具有普遍性和代表
性的微生物作為水的衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)指標(biāo)，如細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)，而致病菌的檢驗(yàn)往往
只在流行病學(xué)調(diào)查時(shí)以相應(yīng)的特檢方法進(jìn)行。
細(xì)菌總數(shù)系指單位重量或體積被檢物經(jīng)處理后，在一定營(yíng)養(yǎng)、溫度和時(shí)間條件培養(yǎng)下，所得
細(xì)菌菌落總數(shù)。國(guó)家規(guī)定和通常采用的細(xì)菌總數(shù)測(cè)定方法是瓊脂傾注平皿法(傾注培養(yǎng))。大
腸菌群數(shù)系指一群在37℃24小時(shí)能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽胞
桿菌數(shù)。大腸菌群數(shù)的檢測(cè)通常采用發(fā)酵法。
【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法】
一細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)
【材料】
普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板無(wú)菌生理鹽水水浴箱吸管試管
【方法】
1水樣采集：自來(lái)水樣采集先用清潔布將水龍頭拭干，再用酒精燈燒灼水龍頭周?chē)鷾缇?/p>
然后把水龍頭完全打開(kāi)，放水5～10分鐘，再將水龍頭關(guān)小，以無(wú)菌三角燒瓶取樣。水源水
樣或食品(礦泉水、飲料、啤酒、游泳池水等)采集后應(yīng)立即檢驗(yàn)，不得超過(guò)4小時(shí)。
2自來(lái)水可不稀釋或作1∶1、1∶10稀釋?zhuān)♂屗⒓礄z驗(yàn)，稀釋液用無(wú)菌生理鹽水。水源
水需根據(jù)水的污濁情況決定稀釋倍數(shù)(1∶10～1∶10000)。
3以無(wú)菌吸管各吸取待測(cè)水樣1ml和0.1ml，分別注入無(wú)菌平皿內(nèi)，每樣品不同水量均重復(fù)2
個(gè)平板。
4溶化普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂，冷至45～50℃時(shí)(可放在45℃水浴保溫)立即傾注于各平板，每板注
量15ml，速與水樣混勻，加蓋待凝。同時(shí)設(shè)對(duì)照平板1個(gè)。
5將平板倒置于37℃恒溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)后計(jì)數(shù)菌落。
【注意事項(xiàng)】
●應(yīng)選擇菌落數(shù)在30～300之間的平板計(jì)算菌落數(shù)。
●同一稀釋度2個(gè)重復(fù)平板的平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即得1ml水中的細(xì)菌總數(shù)。
●菌落數(shù)在100以?xún)?nèi)時(shí)，按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采用二位有效數(shù)字或10的指數(shù)來(lái)表示。
二大腸菌群數(shù)檢測(cè)
【材料】
乳糖蛋白胨培養(yǎng)液普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板伊紅—美藍(lán)瓊脂平板生理鹽水革蘭氏染色液
于氏管
【方法】
1初次發(fā)酵試驗(yàn)：取10支裝有5ml無(wú)菌3倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)基的試管(試管內(nèi)置倒立管以
指示細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)有無(wú)產(chǎn)氣)，分別以無(wú)菌操作加入自來(lái)水樣10ml(水源水
取10ml未稀釋、1∶10、1∶100水樣)，然后將培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)管置37℃培養(yǎng)24小時(shí)。
2平板分離培養(yǎng)：將上述培養(yǎng)后產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸的培養(yǎng)物，分別接種于伊紅—美藍(lán)瓊脂
平板。37℃培養(yǎng)24小時(shí)，挑選深紫黑色，具有金屬光澤；紫黑色，不帶或略有光澤；淡紫色
中心色較深的菌落進(jìn)行涂片、革蘭氏染色、鏡檢。
3再次發(fā)酵試驗(yàn)：上述菌落經(jīng)革蘭氏染色觀察，若為陰性無(wú)芽胞桿菌，取其相應(yīng)的典型菌
落1～3個(gè)再接種于普通濃度的乳糖蛋白胨培養(yǎng)管(內(nèi)放倒立管)，37℃培養(yǎng)24小時(shí)后，有產(chǎn)酸
、產(chǎn)氣者即證實(shí)有大腸菌群存在。依據(jù)有大腸菌群的陽(yáng)性管，報(bào)告每升水樣中的大腸菌群數(shù)
。
附：【衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)指標(biāo)】
1飲用水：細(xì)菌總數(shù)＜100個(gè)/ml，大腸菌群數(shù)≤3/L。
2瓶裝汽水果汁類(lèi)：細(xì)菌總數(shù)≤100個(gè)/ml，大腸菌群數(shù)≤6/L。
3游泳池水：細(xì)菌總數(shù)≤1000個(gè)/ml，大腸菌群數(shù)≤100/L。
【注意事項(xiàng)】
●采集水樣應(yīng)注意無(wú)菌操作，以防雜菌混入，取樣容器應(yīng)常規(guī)滅菌。
●水樣應(yīng)在采集后2小時(shí)內(nèi)低溫保存送檢，若盛于密閉無(wú)菌容器內(nèi)送檢，可延至6小時(shí)。
●檢驗(yàn)水樣時(shí)應(yīng)搖勻后取樣，對(duì)嚴(yán)重污染水應(yīng)稀釋1∶1000甚至1∶10000。
●選擇菌落數(shù)在30～300個(gè)/平板較易準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，對(duì)小至針尖大小的菌落應(yīng)予以注意，切勿漏
計(jì)。
【問(wèn)題】
①報(bào)告自來(lái)水、食品飲料細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群數(shù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并說(shuō)明是否符合衛(wèi)生飲用標(biāo)準(zhǔn)
。
②為什么取大腸菌群數(shù)作為水的衛(wèi)生細(xì)菌學(xué)檢測(cè)指標(biāo)之一?
三人體體表和呼吸道的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)
【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/p>
1了解人體體表和呼吸道的有菌環(huán)境，加強(qiáng)消毒、滅菌觀念。
【實(shí)驗(yàn)原理】
醫(yī)院內(nèi)感染最重要的傳播途徑是經(jīng)工作人員手的間接接觸。醫(yī)院工作人員不可避免地既要接
觸臟的地方(如傷口的敷料)，又要接觸滅菌的部位(如手術(shù)傷口，導(dǎo)管等)。同時(shí)在大多數(shù)情
況下，手是人體中能直接接觸的唯一部位。用手接觸、污染和傳播細(xì)菌量相當(dāng)大�？v觀醫(yī)院
獲得性感染的歷史，手的消毒措施業(yè)已證明是控制醫(yī)院內(nèi)感染最重要的方法之一。
【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與方法】
一手指皮膚的細(xì)菌學(xué)檢查
1取一塊普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板或血平板，用未經(jīng)消毒的手指在培養(yǎng)基表面輕輕地來(lái)回移動(dòng)
，蓋上皿蓋。
2另取一塊普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，用2%碘酒棉球消毒該手指，或用肥皂洗手干燥后，同樣在
培養(yǎng)基表面輕輕來(lái)回劃線，蓋上皿蓋。
3作好標(biāo)記，將平板置于37℃培養(yǎng)24小時(shí)，觀察結(jié)果。
二呼吸道的細(xì)菌檢查
1取血瓊脂平板(為什么要用血瓊脂平板?)一塊，打開(kāi)皿蓋，將培養(yǎng)基放于口腔前約10cm處
。
2受試者用力咳嗽數(shù)次，約30秒，然后蓋上皿蓋。
3將平板置于37℃溫箱培養(yǎng)24小時(shí)，觀察結(jié)果。
【問(wèn)題】
①為什么金黃色葡萄球菌是醫(yī)院內(nèi)感染常見(jiàn)的重要病原菌?
②怎樣從醫(yī)務(wù)人員手指上分離和鑒定金黃色葡萄球菌?
(龍北國(guó)趙衛(wèi)張文炳)
