一、制備坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本 從破壞腦脊髓至游離坐骨神經(jīng)等步驟均與坐骨神經(jīng)-腓神經(jīng)標(biāo)本的制備相同。將游離干凈的坐骨神經(jīng)搭在腓腸肌上,在膝關(guān)節(jié)周圍剪掉全部大腿肌肉,并用粗剪刀將股骨刮干凈,然后在股骨中部剪去上段股骨,剩余的部分就是坐骨神經(jīng)小腿標(biāo)本。用鑷子將腓腸肌跟腱分離并穿線結(jié)扎,于結(jié)扎線遠(yuǎn)端剪斷跟腱。游離腓腸肌至膝關(guān)節(jié)處,然后從膝關(guān)節(jié)囊處剪掉小腿其余部分,這樣即可獲得一個(gè)具有附著在股骨上的腓腸肌并帶有支配腓腸肌的坐骨神經(jīng)的標(biāo)本。 用浸有任氏液的鋅銅弓輕觸坐骨神經(jīng),如果腓腸肌發(fā)生迅速收縮表明標(biāo)本興奮性良好,說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作成功。并將制備好的標(biāo)本放在盛有任氏液的培養(yǎng)皿中,5~1醫(yī)學(xué)全.在線bhskgw.cn0分鐘后開始實(shí)驗(yàn)。 二、儀器連接和標(biāo)本放置 在刺激輸出端口上連接一對(duì)刺激保護(hù)電極,坐骨神經(jīng)置于刺激電極上,保持神經(jīng)與刺激電極接觸良好,棉花引導(dǎo)電極放置在腓腸肌上,引導(dǎo)骨骼肌動(dòng)作電位,另一端輸入計(jì)算機(jī)的1通道。將股骨斷端固定在肌動(dòng)器上,然后將腓腸肌跟腱上的結(jié)扎系線縛于機(jī)械-電換能器懸臂的著力點(diǎn)上,并使肌肉處于自然拉長(zhǎng)的長(zhǎng)度(此線不宜太緊或太松,并應(yīng)與桌面垂直),換能器輸出連于計(jì)算機(jī)的II通道。打開計(jì)算機(jī),啟動(dòng)BL-420E生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。 三、實(shí)驗(yàn)觀察 1. 觀察不同刺激強(qiáng)度對(duì)腓腸肌收縮的影響: 由菜單上選取“實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目-肌肉神經(jīng)實(shí)驗(yàn)-刺激強(qiáng)度與反應(yīng)的關(guān)系”。用單刺激,刺激強(qiáng)度從零開始逐漸增大,找出剛能引起肌肉出現(xiàn)微小收縮的刺激強(qiáng)度(閾強(qiáng)度)。繼續(xù)增大刺激強(qiáng)度,觀察腓腸肌的收縮反應(yīng)是否也相應(yīng)增大。進(jìn)一步增加刺激強(qiáng)度,直至腓腸肌收縮曲線不再繼續(xù)升高為止。找出剛能引起肌肉出現(xiàn)最大收縮的最小刺激強(qiáng)度,即為最大刺激強(qiáng)度。 2. 觀察不同刺激頻率對(duì)腓腸肌收縮的影響: (1)由菜單上選取“實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目-肌肉神經(jīng)實(shí)驗(yàn)-刺激頻率與反應(yīng)的關(guān)系”。選用單刺激,應(yīng)用最大刺激強(qiáng)度,觀察單收縮波形。 (2)用雙刺激,逐漸縮短波間隔,記錄肌肉的復(fù)合收縮。 (3)選用連續(xù)刺激,刺激頻率分別從1Hz、2Hz、4Hz、8Hz、16Hz、32Hz、逐漸增加,記錄不同頻率時(shí)的肌肉收縮曲線,引導(dǎo)出單收縮、不完全強(qiáng)直收縮和完全強(qiáng)直收縮,觀察神經(jīng)干動(dòng)作電位是否融合? 3.觀察興奮-收縮去耦聯(lián)現(xiàn)象 由菜單上選取“實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目-肌肉神經(jīng)實(shí)驗(yàn)-肌肉興奮收縮時(shí)相關(guān)系”,選用最大刺激強(qiáng)度刺激坐骨神經(jīng),觀察腓腸肌的動(dòng)作電位和單收縮波形的關(guān)系,計(jì)算從動(dòng)作電位起點(diǎn)到肌肉收縮起點(diǎn)的時(shí)間。用浸泡甘油的棉花蓋在腓腸肌上,每隔30s刺激坐骨神經(jīng)一次。觀察經(jīng)過(guò)多少分鐘后,只出現(xiàn)動(dòng)作電位,而不出現(xiàn)腓腸肌的收縮。 圖 1 骨骼肌收縮曲線 圖中上方為肌肉收縮曲線:1為單收縮,2為復(fù)合收縮,3為不完全強(qiáng)直收縮,4為強(qiáng)直收縮;下方為刺激頻率標(biāo)記曲線。
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