附2： 廣州醫(yī)科大學(xué)第一臨床學(xué)院
實(shí)驗(yàn)（含診斷學(xué)、外科學(xué)總論)帶教教案
| 教研室 | 臨床免疫檢驗(yàn) | 課程 名稱 | 免疫學(xué)及檢驗(yàn) | 學(xué)時(shí) | 4 | 檢驗(yàn)專業(yè)2003 級(jí) 1、2、3班 | ||||
| 帶教時(shí)間 | 2006 年11 月2日--- 2006 年 11 月 3 日 | 教師 姓名 | 王慧 | 職稱 | 主管技師 | |||||
| 實(shí)檢（見(jiàn)習(xí))項(xiàng)目 | 單個(gè)核細(xì)胞的分離及活性鑒定 | |||||||||
| 本次實(shí)驗(yàn) （見(jiàn)習(xí)) 目的、 要求 | 1．掌握單個(gè)核細(xì)胞分離的有原理及操作方法，熟悉其意義及應(yīng)用 2．掌握細(xì)胞活性測(cè)定的原理及方法，熟悉及意義 | |||||||||
| 內(nèi)容與安排 | 學(xué)時(shí) | |||||||||
| 一、介紹本次實(shí)驗(yàn)、見(jiàn)習(xí)的重點(diǎn)及安排 （實(shí)驗(yàn)課應(yīng)包括：1、實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的采集，2、實(shí)驗(yàn)操作步驟， 3、實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程注意事項(xiàng)，4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)及臨床意義) 1、原理 根據(jù)物理學(xué)中顆粒沉降原理，不同密度的物質(zhì)顆粒在其沉降運(yùn)動(dòng)中可因其比重的差別而處于不同的分布位置。利用此原理可設(shè)計(jì)一定比重的液體界面，將外周血中各種不同比重的細(xì)胞通過(guò)離心沉降而達(dá)到使其彼此分離的目的。 本次實(shí)驗(yàn)采用的是Ficoll分層液法： 主要用于分離外周血中的單個(gè)核細(xì)胞，是一種單次密度梯度離心分離法。聚蔗糖－泛影葡胺是一種較理想的細(xì)胞分層液，其主要成分是一種合成的蔗糖聚合物稱聚蔗糖（商品名為Ficoll)，分離人外周淋巴細(xì)胞以密度為1.077±0.001的分層液最佳，因?yàn)槿说募t細(xì)胞密度為1.093，粒細(xì)胞密度住院醫(yī)師為1.092，單個(gè)核細(xì)胞在1.076～1.090之間。 2、bhskgw.cn器材與試劑 3、單個(gè)核細(xì)胞分離的操作步驟 4、細(xì)胞分離的注意事項(xiàng)：1). 注意分離液與稀釋血的比例，一般以1:2~1:3為宜。 2). 分離時(shí)所取的離心速度與時(shí)間，因各臺(tái)離心機(jī)的離心半徑而異，需事先通過(guò)預(yù)試驗(yàn)決定。 3). 加入稀釋血時(shí)應(yīng)十分小心，注意保護(hù)試管內(nèi)的界面，勿使混淆影響分離效果。 5、細(xì)胞計(jì)數(shù)及活性鑒定：臺(tái)盼蘭染色法，臺(tái)盼藍(lán)又稱錐藍(lán)，是一種陰離子型染料，這種染料不能透過(guò)活細(xì)胞正常完整的細(xì)胞膜，故活細(xì)胞不著色，但死亡細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增加，可使染料通過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使死細(xì)胞著色呈藍(lán)色。 6、細(xì)胞計(jì)數(shù)及活性鑒定的注意事項(xiàng)：3分鐘內(nèi)一定要進(jìn)行檢測(cè)，時(shí)間太長(zhǎng)，活細(xì)胞也會(huì)染上顏色。 7、學(xué)生分組試驗(yàn) 二、討論思考題： 1、如所分離的單個(gè)核細(xì)胞中混有紅細(xì)胞，該怎樣處理？ 2、現(xiàn)分離得到5ML淋巴細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)4大格，計(jì)數(shù)為600，若要校正細(xì)胞濃度為1*105/ML，如何校正？ 3、密度梯度離心法分離人體外周血單個(gè)核細(xì)胞的最適比重是多少？為什么？ 三、小結(jié)要點(diǎn) 1、實(shí)驗(yàn)操作情況 2、需掌握顯微鏡的使用情況 四、布置學(xué)生作業(yè)內(nèi)容 1、1、書(shū)寫(xiě)實(shí)驗(yàn)報(bào)告(包括：實(shí)驗(yàn)?zāi)康�、原理、器材和試劑、操作步驟、注意事項(xiàng)、方法學(xué)評(píng)價(jià)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、結(jié)果分析及結(jié)論、討論) 2、思考題 五、下次實(shí)驗(yàn)（見(jiàn)習(xí))課預(yù)習(xí)范圍及后續(xù)程介紹 下次實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容為：循環(huán)免疫復(fù)合物測(cè)定 預(yù)習(xí)內(nèi)容：什么是循環(huán)免疫復(fù)合物？什么是III型變態(tài)反應(yīng)？ | 4學(xué)時(shí) | |||||||||
| 教案制定時(shí)間： 2006 年 月 日 帶教老師簽名：王慧 | ||||||||||
| 專業(yè)主任審閱意見(jiàn)； 簽名： 年 月 日 | ||||||||||
