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體外受精(in vitro fertilization，IVF)及胚胎移植(embryo transfer，ET)是目前治療不孕癥的主要手段。影響IVFET成功率的因素很多，胚胎質(zhì)量是最重要的因素之一。任何一個IVF，其最終目的就是要達到一個較高的種植懷孕率及獲嬰率，同時盡量避免多胎的發(fā)生。為了實現(xiàn)這一目的，一個好的選擇胚胎的標(biāo)準(zhǔn)變得越來越需要，特別是在一個移植周期，當(dāng)有三個以上的一級胚胎可供移植選擇時，這種需要變得更加迫切。解決這一問題的方法就是尋找更多有一定預(yù)示作用的判斷標(biāo)準(zhǔn)，使其能夠指導(dǎo)以后的胚胎選擇。在以前人IVF中，主要是根據(jù)第2或第3天胚胎的形態(tài)學(xué)特征，來挑選優(yōu)質(zhì)的胚胎進行移植。卵裂期的胚胎一般根據(jù)其形態(tài)學(xué)特征，如卵裂球的數(shù)目，卵裂球的對稱性，胚胎的碎片程度等或其它的一些可見的特征分為幾個級別。所有的這些評價標(biāo)準(zhǔn)都與胚胎的種植和懷孕有關(guān)，它雖然簡單易行，不損傷胚胎，但這些方法的總體成功率還是比較低的，因為有50%以上的移植胚胎沒有進行種植[1]，仍存在一定的局限性。Montfoort(2004)指出，早期卵裂是獨立于胚胎細(xì)胞形態(tài)學(xué)和細(xì)胞數(shù)之外的一種預(yù)示因子。為了提高選擇胚胎的種植潛力，選擇胚胎不應(yīng)該只依賴移植日的胚胎細(xì)胞形態(tài)學(xué)和細(xì)胞數(shù)，還應(yīng)該考慮早期卵裂的發(fā)生[2]。還有報道稱將胚胎早期卵裂作為選擇胚胎的參數(shù)可以提高種植率和妊娠率[3]。Salumets(2003)等報道，移植單個胚胎時，早期卵裂胚胎的妊娠率可達50%，而移植非早期卵裂胚胎的妊娠率只有26.4%[4]。由此可見早期卵裂在IVFET中可以作為篩選胚胎質(zhì)量的參數(shù)。而合子的原核構(gòu)型與卵裂之間又存在著一定的關(guān)系,卵裂前,原核將會發(fā)生旋轉(zhuǎn)并最終平行于極體方向[5]。本研究的目的就是探討胚胎早期卵裂及原核構(gòu)型能否指導(dǎo)移植胚胎的選擇及與胚胎發(fā)育潛力、種植率、懷孕率之間的關(guān)系。
1 資料與方法
1.1 一般資料
本研究材料包括體外受精—胚胎移植(IVFET)和胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)的不孕癥患者129個周期,共1 032個正常受精的卵母細(xì)胞。平均年齡(31.1±3.4)歲。異常受精的卵母細(xì)胞(多原核或單原核)和取卵失敗以及取消移植的周期，均未納入本研究醫(yī).學(xué).全.在.線bhskgw.cn。
1.2 方法
1.2.1 超排卵
采用長方案促排卵：月經(jīng)黃體期(約周期第21天)使用GnRHa進行垂體降調(diào)節(jié)，在月經(jīng)的2～3d測E2、FSH、LH及B超監(jiān)測基礎(chǔ)竇卵泡，據(jù)激素水平及卵泡情況使用促排卵藥物，當(dāng)卵泡直徑達到18mm注射HCG，34～36h后在B超引導(dǎo)下取卵。
1.2.2 精子的準(zhǔn)備
精液樣品以手淫的方法收集于無菌的容器內(nèi)，液化后，對精液中精子密度、活動性及精子的形態(tài)進行評估。根據(jù)精子的密度與活力采用梯度離心(300g×8min)或直接上游等不同的方法進行處理。經(jīng)睪丸穿刺獲得的睪丸組織經(jīng)洗滌后粉碎離心(300g×8min)，取沉淀精子備用。
1.2.3 體外受精(IVF)
經(jīng)陰道穿刺將卵—冠—丘復(fù)合物(OCCCs)取出后，用HTF清洗三遍后，置于HTF培養(yǎng)皿中(100μL/滴，含10%HSA)預(yù)培養(yǎng)，4～6h后放入受精液滴中(100μL HTF/滴，含10% HSA)，每個液滴加入2 000～20 000條活動精子，放入37 ℃，5%CO2，飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
1.2.4 胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)
ICSI時，將洗滌好備用的精子加入5μL 10%的pvp微滴中，注射的卵母細(xì)胞置于5μL含10%HSA的MHTF微滴中，上面覆蓋石蠟油，用固定針在9點鐘的位置固定卵母細(xì)胞，使極體位于6或12點的位置，以注射針吸取單個形態(tài)正常的活動精子，于3點的位置將精子注入卵母細(xì)胞內(nèi)，回吸少量胞漿以確保破膜，后緩慢退出注射針，釋放固定的卵母細(xì)胞，然后注射下一個，方法同上所述。
