方法名稱:
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方法名稱: |
新清寧片—大黃酚的測定—高效液相色譜法 |
應(yīng)用范圍: |
本方法采用高效液相色譜法測定新清寧片中大黃酚的含量。 本方法適用于由熟大黃等幾味中藥制成的新清寧片。 |
方法原理: |
供試品置100mL磨口具塞三角瓶中,精密加入甲醇50mL,冷浸24h,過濾,精密吸取上述濾液10mL,置50mL具塞試管中,于水浴上蒸干甲醇,加水5mL,冰浴冷卻后,加乙醚20mL,鹽酸0.5mL,密閉振搖5min,精密量取上層乙醚液10mL,置另一具塞試管中,溫水中蒸干乙醚,再加入甲醇5mL使殘?jiān)芙,用微孔濾膜(0.45μm)過濾,精密吸取續(xù)濾液10μL,注入高效液相色譜儀,用紫外檢測器檢測大黃酚的吸收值,計(jì)算出其含量。 |
試劑: |
1. 甲醇(色譜純) 2. 乙醚(分析純) 3. 大黃酚(購自中國藥品生物制品檢定所) |
儀器設(shè)備: |
1 儀器 1.1 高效液相色譜儀 1.2 色譜柱 Discovery C18柱(250mm×4.6mm,5μm)。 1.3 紫外檢測器 2 色譜條件 2.1 流動(dòng)相:甲醇 水=80 20(含0.1%的高氯酸) 2.2 柱溫:室溫 2.3 檢測波長:254 nm 2.4 流速:1.0mL/min |
試樣制備: |
1. 稱取供試品 取本品20片,除去包衣,精密稱定,研細(xì)(過65目篩),精密稱取藥粉0.5g。 2. 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取大黃酚對(duì)照品適量,用甲醇溶解制成濃度為0.05mg/ml,作為對(duì)照品溶液。 3. 供試品溶液的制備 供試品置100mL磨口具塞三角瓶中,,精密加入甲醇50mL,冷浸24h,過濾,精密吸取上述濾液10mL,置50mL具塞試管中,于水浴上蒸干甲醇,加水5mL,冰浴冷卻后,加乙醚20mL,鹽酸0.5mL,密閉振搖5min,精密量取上層乙醚液10mL,置另一具塞試管中,溫水中蒸干乙醚,再加入甲醇5mL使殘?jiān)芙,用微孔濾膜(0.45μm)過濾,取續(xù)濾液作為供試品溶液。 注:“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。 |
操作步驟: |
1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取上述對(duì)照液2 、4 、6 、8、10、20μl進(jìn)樣,用紫外檢測器測定大黃酚的吸收度值,以標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度對(duì)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)行線性回歸,得到回歸方程。 .2 供試品的測定 精密吸取上述供試品溶液20μL注入高效液相色譜儀,用紫外檢測器測定大黃酚的吸收度值,計(jì)算出其含量。 |
參考文獻(xiàn): |
周寶寬,張其婉 . HPLC 測定莫家清寧丸中大黃酚的含量. 中藥新藥與臨床藥理,2000,11(5):301-303. |