方法名稱: |
北草烏--生物堿含量測定--HPLC法 |
應(yīng)用范圍: |
確定其主要生物堿含量,以供用藥參考 |
方法原理: |
北草烏根粉分別以不同溶劑,采用不同提取方法進行提取,提取液經(jīng)液相色譜分離,在235nm處測定峰面積,外標法計算含量。 |
儀器設(shè)備及實驗條件: |
儀器設(shè)備 日本島津公司LC-10A 液相色譜儀帶SPD-M10A 二極管陣列紫外檢測器和CLASS-LC10 工作站;ZFQ-5旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(天津玻璃儀器廠);8893E-MT 超聲波清洗器(美國Coli-Parmer) 色譜條件 ODS柱(25mm×4.6mm),流動相:甲醇-水-乙腈(67:33:2),內(nèi)含6mmol/lSDS,0.02mol/lNaH2PO4),流速:1.0ml/min,檢測波長:235 nm |
試樣制備: |
對照品溶液的配制 準確稱取新烏頭堿3.0mg,次烏頭堿2.7mg,烏頭堿2.4mg,用流動相溶液溶解后并移至100ml容量瓶中稀釋至刻度,搖勻,即得. 供試品溶液的配制 分別取8份過6 目標準篩的北草烏根粉各200g盛于2500ml的細口瓶中,四份用于溶劑浸提,4份用于溶劑超聲輔助浸提。分別加10%氨水300ml,放置2h充分浸潤,然后分別兩兩加入1000ml苯、氯仿、乙醇、乙醚作為浸提溶劑,溶劑浸提時間為12h,每隔1h用力振搖,使分散均勻,當進行6h后,傾出溶劑,重新補加1000ml溶劑;超聲輔助浸提兩次,每次各1h,并不時用力振搖,當進行1h后,傾出溶劑,補加另1000 ml 溶劑,繼續(xù)超聲輔助浸提,浸提結(jié)束后,過濾,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上將溶液濃縮,回收溶劑,用2%的鹽酸萃取4次,合并萃取液,加濃氨水調(diào)pH值至9,產(chǎn)生白色絮狀沉淀,靜止過濾后,干燥恒重得烏頭生物堿.。取總烏頭堿10.8mg,用流動相溶液溶解后并移至100ml容量瓶中稀釋至刻度,搖勻,即得。 |
操作步驟: |
分別精密吸取試品溶液10μl,按上述色譜條件測定,外標定量法計算樣品中北草烏生物堿的含量。 |
附件: |
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備注: |
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參考文獻: |
李慧,王劍鋒.北草烏生物堿的超聲輔助浸提及含量測定.大連民族學院學報.2002,4(1):9-11 |