| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1923208A |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2007.03.07 |
| 申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào) | CN200510017086.X |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.08.29 |
| 專(zhuān)利名稱(chēng) | 毛形屬線蟲(chóng)免疫核糖核酸制備方法及醫(yī)用用途 |
| 主分類(lèi)號(hào) | A61K31/70(2006.01)I |
| 分類(lèi)號(hào) | A61K31/70(2006.01)I;A61K31/7088(2006.01)I;A61K35/12(2006.01)I;C07H21/00(2006.01)I;A61P37/04(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人 | 張西臣 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 張西臣;李建華 |
| 地址 | 130062吉林省長(zhǎng)春市西安大路175號(hào)軍需大學(xué) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu) | 吉林長(zhǎng)春新紀(jì)元專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 陳宏偉 |
| 國(guó)省代碼 | 吉林;22 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種毛形屬線蟲(chóng)免疫核糖核酸制備方法，包括以下步驟： 1)毛形屬線蟲(chóng)免疫核糖核酸制備 (1)、動(dòng)物免疫： 將旋毛形線蟲(chóng)免疫一歲齡羊或馬、豬、牛等動(dòng)物，檢查無(wú)傳染病后加福氏佐劑制成乳化的油包水狀，于淋巴結(jié)內(nèi)每只注射1ml，12-14天處死，取肝、脾、心、肺和腎等，進(jìn)行免疫核糖核酸提��； (2)免疫核糖核酸提取 ①采用肝臟免疫核糖核酸制備方法：將羊或馬、豬、牛等動(dòng)物肝用生理鹽水洗凈，切成小塊，加入1-2倍體積0.1mol/L氯化鈉，0.05mol/L枸櫞酸三鈉Triton-100，用組織搗碎機(jī)制成勻漿，離心3500r/min 20min，得離心上清液；取上清液加入等體積0.2mol/L三乙醇胺、10g/L十二烷基硫酸鈉、0.002mol/L乙二胺四乙酸二鈉，攪拌均勻后，加等體積90％苯酚、等體積氯仿，于室溫下震蕩30min，離心3500r/min，20min，得提取物上清液，再加入等量氯仿振搖，反復(fù)2-3次，至中間層界面無(wú)明顯蛋白層為止，離心除去蛋白，收集上清液；將上清液加入1/10體積200g/L乙酸鉀和2倍體積-20℃的無(wú)水乙醇于0℃放置1小時(shí)，離心，得白色沉淀；將沉淀溶解于含有0.001mol/L乙二胺四乙酸二鈉、0.01mol/L乙酸鈉溶液中，加等體積2.5mol/L磷酸氫二鉀，于不斷攪拌下再加等體積的乙二醇甲醚，0℃放置30min，離心，得上清液；將上清液在0℃不斷攪拌下，加入等體積0.2mol/L乙酸鈉液和1/4體積10g/L溴化十六烷基三甲基銨，0℃放置30min，離心取沉淀，用0.1mol/L乙酸鈉液、70％乙醇反復(fù)洗滌5次，至無(wú)泡沫為止；沉淀溶解于0.001mol/L乙二胺四乙酸二鈉，除菌過(guò)濾，測(cè)定含量，無(wú)菌灌裝，冷凍干燥，即得免疫核糖核酸制品； ②采用脾制備免疫核糖核酸 將免疫動(dòng)物馬或羊、豬、牛等動(dòng)物的脾臟去除脂肪組織，稱(chēng)重，剪碎，加入用等量含5g/L十二烷基硫酸鈉、0.14mol/L氯化鈉，0.2％吐溫-80和1g/L皂土的0.01mol/L乙酸緩沖液，置組織搗碎機(jī)中制成勻漿，以3000r/min離心分離，上清液加等體積含5g/L十二烷基硫酸鈉，0.14mol/L氯化鈉和0.001mol/L乙二胺四乙酸二鈉的0.01mol/L的乙酸緩沖液，攪拌15min，加等體積的80％苯酚攪拌10min，以3000r/min離心20min，吸取上層水相，加1/2體積用上述乙酸緩沖液配成的90％苯酚，攪拌5min，離心3000r/min、20min；吸取上層水相，加入氯化鈉至0.1mol/L，在攪拌下加入2.5倍體積預(yù)冷至-20℃的95％乙醇，于-10℃以下冷庫(kù)沉淀，離心2000r/min、10min；收集沉淀物溶于適量的0.14mol/L氯化鈉溶液中，加入等體積氯仿，振搖10min，離心3000r/min、15min；吸取水相，攪拌下加入2.5倍體積，冷至-20℃的95％乙醇洗滌，離心2000r/min、共10min，6號(hào)垂熔漏斗過(guò)濾，無(wú)菌分裝冷凍干燥，即獲得脾免疫核糖核酸制劑。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開(kāi)一種毛形屬線蟲(chóng)免疫核糖核酸制備方法，將旋毛形線蟲(chóng)免疫一歲齡羊或馬、豬、牛等動(dòng)物，檢查無(wú)傳染病后加福氏佐劑制成乳化的油包水狀，于淋巴結(jié)內(nèi)每只注射1ml，12-14天處死，取肝、脾、心、肺和腎等，進(jìn)行免疫核糖核酸提取。本發(fā)明還公開(kāi)了毛形屬線蟲(chóng)免疫核糖核酸在防治人和動(dòng)物免疫功能低下引進(jìn)疾病的醫(yī)用用途，同時(shí)提供了相應(yīng)的藥物制劑。主要用于腫瘤病、早期癌癥、性功能低下和病毒病等免疫功能低下或缺陷引起的疾病的預(yù)防和治療，兼有保健功能。毛形屬線蟲(chóng)免疫核糖核酸醫(yī)療效果好，制劑安全、作用范圍廣，適用于工業(yè)化制備，生產(chǎn)成本低。 |
| 國(guó)際公布 |
