| 公開(公告)號 | CN1923208A |
| 公開(公告)日 | 2007.03.07 |
| 申請(專利)號 | CN200510017086.X |
| 申請日期 | 2005.08.29 |
| 專利名稱 | 毛形屬線蟲免疫核糖核酸制備方法及醫(yī)用用途 |
| 主分類號 | A61K31/70(2006.01)I |
| 分類號 | A61K31/70(2006.01)I;A61K31/7088(2006.01)I;A61K35/12(2006.01)I;C07H21/00(2006.01)I;A61P37/04(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 張西臣 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 張西臣;李建華 |
| 地址 | 130062吉林省長春市西安大路175號軍需大學(xué) |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 吉林長春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 陳宏偉 |
| 國省代碼 | 吉林;22 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種毛形屬線蟲免疫核糖核酸制備方法，包括以下步驟： 1)毛形屬線蟲免疫核糖核酸制備 (1)、動物免疫： 將旋毛形線蟲免疫一歲齡羊或馬、豬、牛等動物，檢查無傳染病后加福氏佐劑制成乳化的油包水狀，于淋巴結(jié)內(nèi)每只注射1ml，12-14天處死，取肝、脾、心、肺和腎等，進(jìn)行免疫核糖核酸提��； (2)免疫核糖核酸提取 ①采用肝臟免疫核糖核酸制備方法：將羊或馬、豬、牛等動物肝用生理鹽水洗凈，切成小塊，加入1-2倍體積0.1mol/L氯化鈉，0.05mol/L枸櫞酸三鈉Triton-100，用組織搗碎機(jī)制成勻漿，離心3500r/min 20min，得離心上清液；取上清液加入等體積0.2mol/L三乙醇胺、10g/L十二烷基硫酸鈉、0.002mol/L乙二胺四乙酸二鈉，攪拌均勻后，加等體積90％苯酚、等體積氯仿，于室溫下震蕩30min，離心3500r/min，20min，得提取物上清液，再加入等量氯仿振搖，反復(fù)2-3次，至中間層界面無明顯蛋白層為止，離心除去蛋白，收集上清液；將上清液加入1/10體積200g/L乙酸鉀和2倍體積-20℃的無水乙醇于0℃放置1小時，離心，得白色沉淀；將沉淀溶解于含有0.001mol/L乙二胺四乙酸二鈉、0.01mol/L乙酸鈉溶液中，加等體積2.5mol/L磷酸氫二鉀，于不斷攪拌下再加等體積的乙二醇甲醚，0℃放置30min，離心，得上清液；將上清液在0℃不斷攪拌下，加入等體積0.2mol/L乙酸鈉液和1/4體積10g/L溴化十六烷基三甲基銨，0℃放置30min，離心取沉淀，用0.1mol/L乙酸鈉液、70％乙醇反復(fù)洗滌5次，至無泡沫為止；沉淀溶解于0.001mol/L乙二胺四乙酸二鈉，除菌過濾，測定含量，無菌灌裝，冷凍干燥，即得免疫核糖核酸制品； ②采用脾制備免疫核糖核酸 將免疫動物馬或羊、豬、牛等動物的脾臟去除脂肪組織，稱重，剪碎，加入用等量含5g/L十二烷基硫酸鈉、0.14mol/L氯化鈉，0.2％吐溫-80和1g/L皂土的0.01mol/L乙酸緩沖液，置組織搗碎機(jī)中制成勻漿，以3000r/min離心分離，上清液加等體積含5g/L十二烷基硫酸鈉，0.14mol/L氯化鈉和0.001mol/L乙二胺四乙酸二鈉的0.01mol/L的乙酸緩沖液，攪拌15min，加等體積的80％苯酚攪拌10min，以3000r/min離心20min，吸取上層水相，加1/2體積用上述乙酸緩沖液配成的90％苯酚，攪拌5min，離心3000r/min、20min；吸取上層水相，加入氯化鈉至0.1mol/L，在攪拌下加入2.5倍體積預(yù)冷至-20℃的95％乙醇，于-10℃以下冷庫沉淀，離心2000r/min、10min；收集沉淀物溶于適量的0.14mol/L氯化鈉溶液中，加入等體積氯仿，振搖10min，離心3000r/min、15min；吸取水相，攪拌下加入2.5倍體積，冷至-20℃的95％乙醇洗滌，離心2000r/min、共10min，6號垂熔漏斗過濾，無菌分裝冷凍干燥，即獲得脾免疫核糖核酸制劑。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開一種毛形屬線蟲免疫核糖核酸制備方法，將旋毛形線蟲免疫一歲齡羊或馬、豬、牛等動物，檢查無傳染病后加福氏佐劑制成乳化的油包水狀，于淋巴結(jié)內(nèi)每只注射1ml，12-14天處死，取肝、脾、心、肺和腎等，進(jìn)行免疫核糖核酸提取。本發(fā)明還公開了毛形屬線蟲免疫核糖核酸在防治人和動物免疫功能低下引進(jìn)疾病的醫(yī)用用途，同時提供了相應(yīng)的藥物制劑。主要用于腫瘤病、早期癌癥、性功能低下和病毒病等免疫功能低下或缺陷引起的疾病的預(yù)防和治療，兼有保健功能。毛形屬線蟲免疫核糖核酸醫(yī)療效果好，制劑安全、作用范圍廣，適用于工業(yè)化制備，生產(chǎn)成本低。 |
| 國際公布 |
