| 公開(公告)號 | CN1243822C |
| 公開(公告)日 | 2006.03.01 |
| 申請(專利)號 | CN03138980.5 |
| 申請日期 | 2003.08.05 |
| 專利名稱 | 一種抗SARS病毒真菌的培養(yǎng)方法 |
| 主分類號 | C12N1/14(2006.01)I |
| 分類號 | C12N1/14(2006.01)I;A01G1/04(2006.01)I;A61K36/074(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 萊陽農(nóng)學(xué)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 宋愛榮;隋方功;趙 晨;田雪梅 |
| 地址 | 265200山東省萊陽市文化路65號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 濟(jì)南三達(dá)專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 李健康 |
| 國省代碼 | 山東;37 |
| 主權(quán)項 | 一種抗SARS病毒真菌的培養(yǎng)方法，其步驟順序如下： (1)菌種選擇：選用多孔菌(Polyporales)中灰樹花(Grifolafrondosa)、靈芝(Ganodermalucidum)、桑黃(Phellinusignirius)、薄樹靈芝(Ganodermacapense)、香栓菌(Trametessuaveloens)之一； (2)斜面培養(yǎng)：將上述菌株接種于pH值調(diào)整為3～12的固體斜面培養(yǎng)基上，15～30℃條件下培養(yǎng)菌體2～5天； (3)一級種子培養(yǎng)：將步驟(2)培養(yǎng)的菌株，無菌條件下用接種針取1～10塊每塊大小為1cm2的斜面培養(yǎng)菌種塊，加入每瓶裝有100～300ml液體培養(yǎng)基的500mL三角搖瓶內(nèi)，pH值調(diào)整為3～12，15～30℃條件下，在旋轉(zhuǎn)搖床上培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速80～220r/min，培養(yǎng)5～10天，制得一級種子； (4)擴(kuò)大培養(yǎng)：以體積比為液體培養(yǎng)基1/10～1/20的接種量，接一級種子于裝有10～20L液體培養(yǎng)基的30L種子罐內(nèi)，pH值調(diào)整為3～12，15～30℃條件下培養(yǎng)，攪拌速度為120～220r/min，通氣量為1∶(0.2～1.5)v/vmin，罐壓控制在0.2～0.5Kg/cm2，培養(yǎng)時間為3～10天，制得二級種子； (5)發(fā)酵罐培養(yǎng)：以體積比為液體培養(yǎng)基1/10～1/20的接種量，接二級種子于裝有200～300L液體培養(yǎng)基的500L的發(fā)酵罐內(nèi)，pH值調(diào)整為3～12，15～30℃條件下培養(yǎng)，攪拌速度為160～220r/min，通氣量為1∶(1.0～1.5)v/vmin，罐的壓力控制在0.3～0.6Kg/cm2，培養(yǎng)時間為5～10天，即得包括菌絲體與澄清液的多孔菌菌絲體液體培養(yǎng)懸浮液； (6)收集菌體：在5000轉(zhuǎn)/分條件下離心5～8分鐘，收集步驟(5)制得的菌體，并用生理鹽水洗滌2～3次；再將菌體置于20～100mmol/L的磷酸鉀緩沖液中，調(diào)節(jié)pH至7～9，測定真菌菌株液體發(fā)酵生物量：菌球數(shù)量以個/100ml計，菌絲體鮮重以g/100ml計，菌絲體干重以g/100ml計； 上述所用固體斜面培養(yǎng)基或液體培養(yǎng)基配方是：1000毫升蒸餾水中加入谷物類淀粉或玉米面或黃豆粉或馬鈴薯淀粉或麩皮5～30克、酵母膏或酵母粉1～10克、蛋白胨1～20克、磷酸二氫鉀0.1～2克、硫酸鎂0.1～5克、葡萄糖或蔗糖10～40克；pH值調(diào)整為3～12。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種抗SARS病毒真菌的培養(yǎng)方法，該方法包括(1)菌種選擇，(2)斜面培養(yǎng)，(3)一級種子培養(yǎng)，(4)擴(kuò)大培養(yǎng)，(5)發(fā)酵罐培養(yǎng)，(6)收集菌體等步驟；該方法具有工藝簡便、生長量大、得率高、成本低廉的特點，并且利用本發(fā)明培養(yǎng)的多孔菌所提取的粗提物對SARS病毒具有完全的抑制作用，具有很好的社會效益和應(yīng)用前景。 |
| 國際公布 |
