| 公開(公告)號 | CN1311085C |
| 公開(公告)日 | 2007.04.18 |
| 申請(專利)號 | CN200410083825.0 |
| 申請日期 | 2004.10.19 |
| 專利名稱 | 分枝桿菌分子菌種鑒定試劑盒的制備及其應用 |
| 主分類號 | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分類號 | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權 | |
| 申請(專利權)人 | 中國人民解放軍第三○九醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設計)人 | 吳雪瓊;梁建琴;張俊仙;李洪敏 |
| 地址 | 100091北京市海淀區(qū)黑山扈甲十七號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構 | 北京北新智誠知識產權代理有限公司 |
| 代理人 | 耿小強 |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權項 | 一種分枝桿菌分子菌種鑒定試劑盒，含有分枝桿菌分子菌種鑒定膜片和分枝桿菌PCR擴增試劑，其特征在于：所述分枝桿菌分子菌種鑒定膜片是在硝酸纖維膜上固定一系列針對分枝桿菌屬和各種分枝桿菌16S核糖體核糖核酸而設計的寡聚核苷酸探針，所述的寡聚核苷酸探針在3’末端加有50-110個脫氧核糖核酸；所述的分枝桿菌PCR擴增試劑包括針對分枝桿菌屬16S rRNA進行擴增所需的5-10倍PCR緩沖液，濃度各為2.5mmol/L的dGTP、dCTP、dATP和dTTP，濃度各為2.5-12.5μmol/L的5’端帶生物素標記的上游引物和不帶標記的下游引物以及1-10U/μl Taq DNA聚合酶；所述的寡聚核苷酸探針序列如下表所示：┏━━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━┓┃ 探針名稱┃ 探針序列 ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ M ┃ 5’-TATTAGACCCAGTTTCCC-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ a ┃ 5’-ACAAGACATGCATCCCGT-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ b ┃ 5’-GACATGCGTCTTGAGGTC-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ c ┃ 5’-TAAAGACATGCGCCTAAA-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ d ┃ 5’-CGCCAAGTGGTCCTATCC-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ h ┃ 5’-CACACCATGCAGCATG-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ ┃ ┃┃ i ┃ 5’-CAGAACATGCATCCCA-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ ┃ ┃┃ j ┃ 5’-CGCAGAATGGTCCTATCC-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ k ┃ 5’-CATGTGTCCTGTGGTCCT-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ l ┃ 5’-CATGCGCCTCGGGGTCCT-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ m ┃ 5’-AGGACATGAATCCCGT-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ n ┃ 5’-ATGCGACCAATAGGGAAT-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ o ┃ 5’-CACACCAGGAAGTGCG-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ p ┃ 5’-ACTCACCATGAAGTGTGT-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ q ┃ 5’-CGACCAGCAGGGTGTATT-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ r ┃ 5’-ACACACCATGAAGCGCGT-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ s ┃ 5’-TCCCAGCCATGCAACCAG-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ t ┃ 5’-CACACACCATGAAGCAT-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ u ┃ 5’-GACATGCATCGCGTAG-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ w ┃ 5’-CACCATGCGACATGTG-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ y ┃ 5’-AGACAATGCAGCCAGA-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ z ┃ 5’-CACCCCATGAAGAGCG-3’ ┃┣━━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ aa ┃ 5’-CCACCAGGCCATGCGA-3’ ┃┗━━━━━┻━━━━━━━━━━━━━━━┛┏━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━┓┃ ab ┃ 5’-CACATGCATGCCGTGG-3’ ┃┣━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━┫┃ ac ┃ 5’-CAACCCATGAAGGCCA-3’ ┃┗━━━━┻━━━━━━━━━━━━━━┛ 所述的5’端帶生物素標記的上游引物和不帶標記的下游引物序列如下表所示。┏━━━━┳━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┓┃ 靶基因┃ 引物序列(5’→3’) ┃┣━━━━╋━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┫┃ ┃ 上游引物5′-bio-CGA GTG GCG AAC GGG ┃┃ 16S ┃ TGAG G--3′ ┃┃ rRNA ┃ 下游引物5′-TTG TGC AAT ATT CCC CAC ┃┃ ┃ TGC TG--3′ ┃┗━━━━┻━━━━━━━━━━━━━━━━━━━┛ |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種分枝桿菌分子菌種鑒定試劑盒及其制備方法，可以根據不同種分枝桿菌16S rRNA基因序列，設計、合成相應的寡核苷酸探針，通過點樣法將寡核苷酸探針按一定的順序點在經預處理的硝酸纖維膜上，制成檢測鑒定膜片，與帶生物素標記的PCR擴增產物雜交。利用本發(fā)明的鑒定試劑盒，根據探針雜交的藍紫色信號強弱用肉眼判讀結果，可同時快速、準確地檢測分枝桿菌，鑒別分枝桿菌與非分枝桿菌及結核分枝桿菌復合群與非結核分枝桿菌，鑒定分枝桿菌菌種，24小時內即可報告結果，從而輔助臨床診斷、指導臨床開展早期有效的化療。 |
| 國際公布 |
