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您現(xiàn)在的位置: 醫(yī)學全在線 >> 藥學理論 >> 中國藥品專利文獻 >> 正文:制備用于在大腸桿菌和昆蟲細胞中表達鴨α-干擾素基因的方法專利檢索:專利號/專利人/發(fā)明人
    

制備用于在大腸桿菌和昆蟲細胞中表達鴨α-干擾素基因的方法

公開(公告)號 CN1861796A  
公開(公告)日 2006.11.15  
申請(專利)號 CN200510009978.5  
申請日期 2005.05.13  
專利名稱 制備用于在大腸桿菌和昆蟲細胞中表達鴨α-干擾素基因的方法  
主分類號 C12N15/70(2006.01)I  
分類號 C12N15/70(2006.01)I;C12N15/85(2006.01)I;C12N15/21(2006.01)I;C12N15/866(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 東北農(nóng)業(yè)大學  
發(fā)明(設(shè)計)人 王君偉;任桂萍;許麗娜;李洪濤  
地址 150030黑龍江省哈爾濱市香坊區(qū)木林街59號  
頒證日  
國際申請  
進入國家日期  
專利代理機構(gòu) 哈爾濱市哈科專利事務(wù)所有限責任公司  
代理人 祖玉清  
國省代碼 黑龍江;23  
主權(quán)項 制備用于在大腸桿菌和昆蟲細胞中表達鴨α-干擾素基因的方法,其特征是: (1)用淋巴細胞分離液分離鴨外周血單核細胞,植物血凝素誘導(dǎo)培養(yǎng)鴨外周血單核細胞,收獲誘導(dǎo)培養(yǎng)的細胞,用Trizol試劑提取細胞總RNA; (2)設(shè)計擴增鴨α-干擾素基因的特異性引物,如下: 上游引物P1 20bp:5′-GCACAACCCAGGATCCACCA-3′,引入BamH I酶切位點; 下游引物P2 19bp:5′-GTGCGCGTGTGGGGTACCT-3′; (3)利用RT-PCR技術(shù)擴增鴨α-干擾素基因; (4)對鴨α-干擾素基因進行克隆、測序鑒定; (5)利用BamH I、Sal I這兩個多克隆位點,將鴨α-干擾素基因定向亞克隆至原核表達載體pET30a和昆蟲桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pBlueBacHis2A上; (6)重組表達質(zhì)粒pET30a-DuIFN-α轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)plysS; (7)確定原核表達系統(tǒng)中表達鴨α-干擾素的最佳誘導(dǎo)時間和IPTG濃度; (8)鴨α-干擾素在大腸桿菌BL21(DE3)plysS中的誘導(dǎo)表達; (9)重組表達質(zhì)粒pBlueBacHis2A-DuIFN-α與桿狀病毒線性DNA共轉(zhuǎn)染昆蟲細胞Sf9細胞株; (10)噬斑分析篩選重組病毒; (11)確定真核表達系統(tǒng)中表達重組鴨α-干擾素的最佳表達時間和感染復(fù)數(shù); (12)按最佳表達時間和MOI接種病毒,感染Sf9細胞,在Sf9細胞中表達鴨α-干擾素。  
摘要 本發(fā)明涉及制備用于在大腸桿菌和昆蟲細胞中表達鴨α-干擾素基因的方法。包括編碼鴨α-干擾素的基因的克隆,含鴨α-干擾素基因的原核表達載體和重組昆蟲桿狀病毒轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建,用所述含鴨α-干擾素基因的重組原核表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌和誘導(dǎo)表達,用所述含鴨α-干擾素基因的重組桿狀病毒轉(zhuǎn)染昆蟲細胞及在昆蟲細胞中的表達等。通過本方法制備的產(chǎn)品為研究鴨α-干擾素生物活性及其作用機理提供了基礎(chǔ),也可制備成抗病毒的藥物。  
國際公布  
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