公開(kāi)(公告)號(hào)
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CN1766106A
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公開(kāi)(公告)日
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2006.05.03
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200510060786.7
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申請(qǐng)日期
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2005.09.15
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專利名稱
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腦鈉肽(BNP)制備方法
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主分類號(hào)
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C12N15/09(2006.01)I
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分類號(hào)
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C12N15/09(2006.01)I;C12N15/16(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I;A61K38/22(2006.01)I;G01N33/53(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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浙江大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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周林福;陳 峰;朱海紅;陳 智
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地址
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310029浙江省杭州市西湖區(qū)延安路浙大湖濱校區(qū)醫(yī)學(xué)院
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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杭州中成專利事務(wù)所有限公司
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代理人
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馮子玲
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國(guó)省代碼
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浙江;33
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主權(quán)項(xiàng)
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腦鈉肽(BNP)的制備方法,其特征在于以下步驟: (1)采用PCR技術(shù)將表達(dá)BNP的目的基因擴(kuò)增,并純化其產(chǎn)物; (2)將純化的PCR產(chǎn)物于BamHI與HindIII雙酶切后定向插入經(jīng)同樣雙酶切的pet32a,獲得重組質(zhì)粒Pet32a+BNP; (3)將重組質(zhì)粒Pet32a+BNP轉(zhuǎn)化至大腸桿菌DH5a,經(jīng)培養(yǎng)擴(kuò)增,抽提純化,測(cè)序分析,獲測(cè)序正確的重組質(zhì)粒; (4)將測(cè)序正確的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至BL21DE30菌,在30℃,0.1mMIPTG條件下表達(dá)重組蛋白; (5)將表達(dá)重組蛋白的活化菌株接種到2-YT培養(yǎng)基恒溫振蕩培養(yǎng),進(jìn)行搖瓶實(shí)驗(yàn),工程菌在發(fā)酵罐中高密度發(fā)酵,種子菌按5%比例接種,在低溶氧條件下誘導(dǎo),放罐,離心得菌體; (6)將離心得到的菌體沉淀進(jìn)行細(xì)胞裂解,洗滌出包涵體,溶解包涵體,His柱過(guò)柱純化。
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摘要
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本發(fā)明公開(kāi)了一種腦鈉肽(BNP)的制備方法,為克服傳統(tǒng)提取BNP方法成本高、收率低,目的蛋白容易變性,材料來(lái)源有限等諸多缺陷,本發(fā)明在制備BNP過(guò)程中,用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因,以Pet32a作為載體質(zhì)粒,酶切定向插入BNP目的基因后形成重組質(zhì)粒,以大腸桿菌DH5α,BL21(DE3)作為表達(dá)菌株,以His柱作為純化柱子分離純化目的蛋白。這種制備方法既可方便檢測(cè),又可增強(qiáng)重組蛋白的穩(wěn)定性。運(yùn)用本發(fā)明技術(shù)獲得的BNP通過(guò)免疫學(xué)方法制成診斷試劑盒,可快速、準(zhǔn)確、特異地診斷和鑒別診斷許多心血管疾病。
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國(guó)際公布
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