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一種人野生型P53融合蛋白

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1760208A  
公開(kāi)(公告)日 2006.04.19  
申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào) CN200410046844.6  
申請(qǐng)日期 2004.10.15  
專(zhuān)利名稱(chēng) 一種人野生型P53融合蛋白  
主分類(lèi)號(hào) C07K19/00(2006.01)I  
分類(lèi)號(hào) C07K19/00(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人 蘇先獅  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 蘇先獅;龔國(guó)忠  
地址 410011湖南省長(zhǎng)沙市人民中路86號(hào)中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院肝病研究所  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu) 湖南兆弘專(zhuān)利事務(wù)所  
代理人 張美娟  
國(guó)省代碼 湖南;43  
主權(quán)項(xiàng) 一種人野生型P53融合蛋白,其特征在于該融合蛋白的cDNA的核苷酸序列和相應(yīng)的編碼基酸序列如下: gggatccggcgtcgtcagcagcgacgtaaaaagaggatggaggagccg48 GlyIleArgArgArgGlnGlnArgArgLysLysArgMetGluGluPro 151015 cagtcagatcctagcgtcgagccccctctgagtcaggaaacattttca96 GlnSerAspProSerValGluProProLeuSerGlnGluThrPheSer 202530 gacctatggaaactacttcctgaaaacaacgttctgtcccccttgccg144 AspLeuTrpLysLeuLeuProGluAsnAsnValLeuSerProLeuPro 354045 tcccaagcaatggatgatttgatgctgtccccggacgatattgaacaa192 SerGlnAlaMetAspAspLeuMetLeuSerProAspAspIleGluGln 505560 tggttcactgaagacccaggtccagatgaagctcccagaatgccagag240 TrpPheThrGluAspProGlyProAspGluAlaProArgMetProGlu 65707580 gctgctccccccgtggcccctgcaccagcagctcctacaccggcggcc288 AlaAlaProProValAlaProAlaProAlaAlaProThrProAlaAla 859095 cctgcaccagccccctcctggcccctgtcatcttctgtcccttcccag336 ProAlaProAlaProSerTrpProLeuSerSerSerValProSerGln 100105110 aaaacctaccagggcagctacggtttccgtctgggcttcttgcattct384 LysThrTyrGlnGlySerTyrGlyPheArgLeuGlyPheLeuHisSer 115120125 gggacagccaagtctgtgacttgcacgtactcccctgccctcaacaag432 GlyThrAlaLysSerValThrCysThrTyrSerProAlaLeuAsnLys 130135140 atgttttgccaactggccaagacctgccctgtgcagctgtgggttgat480 MetPheCysGlnLeuAlaLysThrCysProValGlnLeuTrpValAsp 145150155160 tccacacccccgcccggcacccgcgtccgcgccatggccatctacaag528 SerThrProProProGlyThrArgValArgAlaMetAlaIleTyrLys 165170175 cagtcacagcacatgacggaggttgtgaggcgctgcccccaccatgag576 GlnSerGlnHisMetThrGluValValArgArgCysProHisHisGlu 180185190 cgctgctcagatagcgatggtctggcccctcctcagcatcttatccga624 ArgCysSerAspSerAspGlyLeuAlaProProGlnHisLeuIleArg 195200205 gtggaaggaaatttgcgtgtggagtatttggatgacagaaacactttt672 ValGluGlyAsnLeuArgValGluTyrLeuAspAspArgAsnThrPhe 210215220 cgacatagtgtggtggtgccctatgagccgcctgaggttggctctgac720 ArgHisSerValValValProTyrGluProProGluValGlySerAsp 225230235240 tgtaccaccatccactacaactacatgtgtaacagttcctgcatgggc768 CysThrThrIleHisTyrAsnTyrMetCysAsnSerSerCysMetGly 245250255 ggcatgaaccggaggcccatcctcaccatcatcacactggaagactcc816 GlyMetAsnArgArgProIleLeuThrIleIleThrLeuGluAspSer 260265270 agtggtaatctactgggacggaacagctttgaggtgcgtgtttgtgcc864 SerGlyAsnLeuLeuGlyArgAsnSerPheGluValArgValCysAla 275280285 tgtcctgggagagaccggcgcacagaggaagagaatctccgcaagaaa912 CysProGlyAsgAspArgThgThrGluGluGluAsnLeuArgLysLys 290295300 ggggagcctcaccacgagctgcccccagggagcactaagcgagcactg960 GlyGluProHisHisGluLeuProProGlySerThrLysArgAlaLeu 305310315320 cccaacaacaccagctcctctccccagccaaagaagaaaccactggat1008 ProAsnAsnThrSerSerSerProGlnProLysLysLysProLeuAsp 325330335 ggagaatatttcacccttcagatccgtgggcgtgagcgcttcgagatg1056 GlyGluTyrPheThrLeuGlnIleArgGlyArgGluArgPheGluMet 340345350 ttccgagagctgaatgaggccttggaactcaaggatgcccaggctggg1104 PheArgGluLeuAsnGluAlaLeuGluLeuLysAspAlaGlnAlaGly 355360365 aaggagccaggggggagcagggctcactccagccacctgaagtccaaa1152 LysGluProGlyGlySerArgAlaHisSerSerHisLeuLysSerLys 370375380 aagggtcagtctacctcccgccataaaaaactcatgttcaagacagaa1200 LysGlyGlnSerThrSerArgHisLysLysLeuMetPheLysThrGlu 385390395400 gggcctgactcagactga1218 GlyProAspSerAsp--- 405  
摘要 本發(fā)明涉及一種P53融合蛋白。本發(fā)明將人wtP53基因cDNA片段和蛋白傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(PTD)融合,插入到大腸桿菌原核表達(dá)載體PGEX-3X中,得到重組表達(dá)質(zhì)粒PGEX-3X-P53,利用IPTG誘導(dǎo)產(chǎn)生wtP53融合蛋白;分子量約為53kbp,經(jīng)DNA序列測(cè)定,它由1218個(gè)核苷酸組成;經(jīng)MTT法及TUMEL法體外實(shí)驗(yàn),表明wtP53融合蛋白可明顯抑制癌細(xì)胞H1299和肝癌細(xì)胞HePG2的增殖,促進(jìn)其調(diào)亡,本發(fā)明為應(yīng)用wtP53融合蛋白治療腫瘤提供了可靠的途徑。  
國(guó)際公布  
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