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人重組乙型干擾素的高效表達(dá)及其應(yīng)用

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1325651C  
公開(kāi)(公告)日 2007.07.11  
申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào) CN01112983.2  
申請(qǐng)日期 2001.05.24  
專(zhuān)利名稱(chēng) 人重組乙型干擾素的高效表達(dá)及其應(yīng)用  
主分類(lèi)號(hào) C12N15/63(2006.01)I  
分類(lèi)號(hào) C12N15/63(2006.01)I;C12N15/67(2006.01)I;C12N15/20(2006.01)I;A61P29/00(2006.01)I;A61P19/02(2006.01)I;A61P17/06(2006.01)I;A61P3/10(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;A61P1/16(2006.01)I  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人 大連金威基因技術(shù)有限公司  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 秦 瑩  
地址 116001遼寧省大連市民意街40號(hào)海景花園大廈25樓  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu) 上海東亞專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司  
代理人 董 梅  
國(guó)省代碼 遼寧;21  
主權(quán)項(xiàng) 一種高效表達(dá)人重組乙型干擾素的方法,其特征在于:通過(guò)真核細(xì)胞表達(dá)載體來(lái)轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞,使之生產(chǎn)重組人乙型干擾素,真核細(xì)胞表達(dá)載體是昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)載體或酵母菌表達(dá)載體中的一種,其中:所述真核細(xì)胞表達(dá)載體是昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)載體時(shí),所述宿主細(xì)胞是昆蟲(chóng)細(xì)胞,克隆的人乙型干擾素通過(guò)去除天然的疏水性信號(hào)肽序列,代之以新的桿狀病毒信號(hào)肽來(lái)進(jìn)行修飾,這些嵌合基因被引入桿狀病毒表達(dá)載體后,桿狀病毒多角體蛋白啟動(dòng)子指導(dǎo)被感染的昆蟲(chóng)細(xì)胞中重組乙型干擾素蛋白的表達(dá),而由18個(gè)基酸組成的桿狀病毒信號(hào)肽僅指導(dǎo)人乙型干擾素的翻譯進(jìn)入昆蟲(chóng)細(xì)胞的糖基化途徑,其本身并不出現(xiàn)在成熟的人乙型干擾素糖蛋白上;所述真核細(xì)胞表達(dá)載體是酵母菌表達(dá)載體時(shí),所述宿主細(xì)胞是酵母菌,克隆的人乙型干擾素通過(guò)去除天然的疏水性信號(hào)肽序列,代之以新的分泌型酵母菌信號(hào)肽來(lái)進(jìn)行修飾,這些嵌合基因被引入酵母菌表達(dá)載體后,被轉(zhuǎn)化到酵母菌中發(fā)酵,同時(shí)生產(chǎn)重組人乙型干擾素,分泌型酵母菌信號(hào)肽指導(dǎo)乙型干擾素的翻譯進(jìn)入酵母細(xì)胞的糖基化途徑,并分泌至培養(yǎng)上清中,其本身并不出現(xiàn)在成熟的人乙型干擾素糖蛋白上。  
摘要 本發(fā)明人重組乙型干擾素的高效表達(dá)及其應(yīng)用涉及采用生物基因工程的方法在真核細(xì)胞系統(tǒng)中表達(dá)重組人乙型干擾素,以及重組人乙型干擾素的用途。本發(fā)明人重組乙型干擾素的高效表達(dá)系通過(guò)真核細(xì)胞表達(dá)載體來(lái)轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞,使之生產(chǎn)重組人乙型干擾素,所述真核細(xì)胞表達(dá)載體是昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)載體時(shí),所述宿主細(xì)胞是昆蟲(chóng)細(xì)胞;所述真核細(xì)胞表達(dá)載體是酵母菌表達(dá)載體時(shí),所述宿主細(xì)胞是酵母菌。本發(fā)明利用具有糖基化功能的昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)和酵母菌表達(dá)系統(tǒng)來(lái)表達(dá)人乙型干擾素基因,所表達(dá)和生產(chǎn)的蛋白量相對(duì)量大、純度高。本發(fā)明中所描述的表達(dá)高產(chǎn)量重組人乙型干擾素的方法可以使臨床應(yīng)用所需要的重組蛋白藥物的制備簡(jiǎn)單化和廉價(jià)化。  
國(guó)際公布  
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