| 公開(公告)號(hào) | CN1297314C |
| 公開(公告)日 | 2007.01.31 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410040721.1 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.09.16 |
| 專利名稱 | 減毒株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗培養(yǎng)方法 |
| 主分類號(hào) | A61K39/13(2006.01)I |
| 分類號(hào) | A61K39/13(2006.01)I;A61P31/14(2006.01)I;C12N7/00(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 褚嘉祐;姜述德;廖國(guó)陽(yáng);孫明波;李衛(wèi)東;張麗旌;謝忠平;俞泳霆 |
| 地址 | 650118云南省昆明市茭菱路379號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 昆明正原專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 徐玲菊 |
| 國(guó)省代碼 | 云南;53 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種減毒株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗培養(yǎng)方法，其特征在于它經(jīng)過(guò)下列工藝步驟：1)、三級(jí)放大細(xì)胞培養(yǎng)：a、首先對(duì)細(xì)胞種子進(jìn)行離心清洗，按最低需求培養(yǎng)液MEM∶Vero細(xì)胞種子＝500-1000∶1的比例，接種到5-10升小容量發(fā)酵罐中進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，控制培養(yǎng)溫度35-37℃，pH7.0-7.4，溶解氧30-50％，并于培養(yǎng)第三天開始灌流，灌流量按細(xì)胞生長(zhǎng)情況由1升/天最終增加到5升/天，培養(yǎng)5-7天，使細(xì)胞增殖至1-3×106個(gè)細(xì)胞/毫升，進(jìn)行胰酶消化；b、將a步驟胰酶消化過(guò)的細(xì)胞懸液，按最低需求培養(yǎng)液MEM∶Vero細(xì)胞種子＝500-1000∶1的比例，接種于50-85升中容量發(fā)酵罐中培養(yǎng)，控制培養(yǎng)溫度35-37℃，pH7.07.4，溶解氧30-50％，在再循環(huán)培養(yǎng)液體積為50-100升條件下，于第三天開始進(jìn)行再循環(huán)培養(yǎng)，培養(yǎng)5-7天，使細(xì)胞密度達(dá)1-3×106個(gè)細(xì)胞/毫升，進(jìn)行胰酶消化；c、將b步驟胰酶消化過(guò)的細(xì)胞懸液，按最低需求培養(yǎng)液MEM∶Vero細(xì)胞種子＝500-1000∶1的比例，接種于300-550升大容量發(fā)酵罐中培養(yǎng)，控制培養(yǎng)溫度35-37℃，pH7.07.4，溶解氧30-50％，培養(yǎng)5-7天，使細(xì)胞密度為1-3×106個(gè)細(xì)胞/毫升；2)、病毒培養(yǎng)：收獲c步驟的細(xì)胞培養(yǎng)液，用M199洗細(xì)胞一次，加入M199培養(yǎng)液，按病毒∶細(xì)胞＝0.01-0.1∶1的比例，接種脊髓灰質(zhì)炎減毒株病毒，進(jìn)行病毒培養(yǎng)，控制培養(yǎng)溫度32-34℃，pH7.07.4，溶解氧20-30％，培養(yǎng)48-96小時(shí)，收獲病毒液。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供一種減毒株脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗培養(yǎng)方法，采用Vero細(xì)胞、脊髓灰質(zhì)炎減毒株病毒，在發(fā)酵罐中進(jìn)行培養(yǎng)，通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模的三級(jí)放大，使細(xì)胞培養(yǎng)面積相當(dāng)于21000個(gè)1升玻璃瓶靜置培養(yǎng)的面積，且細(xì)胞產(chǎn)量是常規(guī)1升瓶靜置培養(yǎng)的21000倍，常規(guī)10升轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的2100倍，既減少了培養(yǎng)空間，又降低了培養(yǎng)液用量，同時(shí)也減少了勞動(dòng)力投入，短時(shí)間內(nèi)即可實(shí)現(xiàn)大規(guī)模制備細(xì)胞及病毒液，滿足脊髓灰質(zhì)炎滅活疫苗對(duì)大量病毒抗原的需求。另用本發(fā)明生產(chǎn)的病毒液制備成疫苗后，質(zhì)量穩(wěn)定可靠，安全性及免疫原性良好，經(jīng)檢定全部符合國(guó)家生物制品規(guī)程的要求。 |
| 國(guó)際公布 |
