| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1295328C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2007.01.17 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200510012411.3 |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.03.23 |
| 專利名稱 | 一種分離蚯蚓纖溶酶單一組分的方法 |
| 主分類號(hào) | C12N9/68(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N9/68(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 河北大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 趙曉瑜;靜天玉;武金霞 |
| 地址 | 071002河北省保定市合作路1號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 石家莊科誠(chéng)專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 陳建民 |
| 國(guó)省代碼 | 河北;13 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種分離蚯蚓纖溶酶單一組分的方法，其特征在于以濾紙為載體，偶聯(lián)大豆胰蛋白酶抑制劑，構(gòu)成蚯蚓纖溶酶親和層析系統(tǒng)，通過(guò)親和層析和梯度洗脫從蚯蚓勻漿液分離出一種為糖蛋白的蚯蚓3#纖溶酶組分，其分子量為24056道爾頓；本方法的具體步驟如下：(1)用常規(guī)方法制備蚯蚓勻漿液；(2)親和層析系統(tǒng)的制備：a、載體的預(yù)處理：載體選用實(shí)驗(yàn)室用的定性濾紙，在兩層濾紙之間夾一層尼龍窗紗后卷成濾紙卷、將濾紙卷放入燒杯中，將0.5～2.0mol/L的氫氧化鈉溶液倒入燒杯中攪拌一小時(shí)，倒出溶液；再將同樣濃度的氫氧化鈉溶液并且其中含有1％～10％的環(huán)氧氯丙烷和1mg/ml的NaBH4倒入燒杯中、在50～70℃時(shí)攪拌10～60分鐘，倒出溶液，用去離子水洗2～3次；b、載體的活化：將上述預(yù)處理過(guò)的濾紙卷浸入0.1mol/L的醋酸-醋酸鈉中，該醋酸-醋酸鈉中含10～60m mol/l的高碘酸鈉，其PH值為4～6，室溫避光攪拌10～60分鐘，用去離子水洗2～3次。c、載體與大豆胰蛋白酶抑制劑偶聯(lián)：將上述經(jīng)活化處理后的濾紙卷用0.1mol/L的碳酸氫鈉溶液洗一次，然后將其浸入含有大豆胰蛋白酶抑制劑的碳酸鈉溶液中，碳酸鈉溶液的溶度為0.1mol/L，其中大豆胰蛋白酶抑制劑的含量為5～50mg/ml，4～8℃時(shí)，攪拌18～22小時(shí)，再依次用PH9.0的碳酸氫鈉、PH4.0的醋酸-醋酸鈉溶液清洗；最后將偶聯(lián)了大豆胰蛋白酶抑制劑的濾紙卷懸浮于PBS溶液中，該溶液PH7.4、內(nèi)含1m mol/ml的NaBH4，4～8℃時(shí)，攪拌一小時(shí)，再用PBS溶液洗2～3次；d、裝柱：將上述偶聯(lián)了大豆胰蛋白酶抑制劑的濾紙卷除去水分后裝入玻璃層析柱中；層析柱裝好后用PBS溶液進(jìn)行平衡；(3)親和層析：將蚯蚓勻漿液連續(xù)泵入層析柱中，同時(shí)監(jiān)測(cè)流出液的纖溶酶的含量，當(dāng)流出液纖溶酶含量超過(guò)4～8μg/ml時(shí)，停止進(jìn)樣，然后用PBS溶液平衡；(4)梯度洗脫：借助于梯度混合儀和輸液泵進(jìn)行連續(xù)洗脫，洗脫劑是由PBS溶液和0～6mol/L的尿素組成的混合洗脫劑，用分布收集器收集洗脫下來(lái)的樣品，分別收集蚯蚓2#、3#、4#纖溶酶組分的洗脫峰，2#、3#、4#纖溶酶組分分別對(duì)應(yīng)2、3、4號(hào)洗脫峰；最后將洗脫樣品對(duì)水透析，凍干保存。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種分離蚯蚓纖溶酶單一組分的方法，特別是從中分離出一種為糖蛋白的蚯蚓3#纖溶酶組分，其分子量為24056道爾頓，與其它單組分蚯蚓纖溶酶相比較其體內(nèi)溶栓作用最強(qiáng)，對(duì)凝血時(shí)間影響最小，可用于開(kāi)發(fā)抗栓和溶栓藥物。本發(fā)明以濾紙為載體，偶聯(lián)大豆胰蛋白酶抑制劑，構(gòu)成蚯蚓纖溶酶親和層析系統(tǒng)，通過(guò)親和層析和梯度洗脫從蚯蚓勻漿液分離出蚯蚓3#纖溶酶組分。本發(fā)明的有益效果是由于改進(jìn)了親和層析介質(zhì)，用廉價(jià)的濾紙代替昂貴的珠狀瓊脂糖，使生產(chǎn)成本大大降低，從而適合于大規(guī)模生產(chǎn)，另外它還具有方法簡(jiǎn)便實(shí)用的特點(diǎn)。 |
| 國(guó)際公布 |
