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骨保護(hù)素融合蛋白的制備方法和用途

公開(公告)號 CN1263771C  
公開(公告)日 2006.07.12  
申請(專利)號 CN03129304.2  
申請日期 2003.06.16  
專利名稱 骨保護(hù)素融合蛋白的制備方法和用途  
主分類號 C07K19/00(2006.01)I  
分類號 C07K19/00(2006.01)I;C12N15/62(2006.01)I;A61K38/16(2006.01)I;A61P19/10(2006.01)I;A61P19/08(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 上海富純中南生物技術(shù)有限公司  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 倪 健;楊武劍;羅 鵬;楊子義;遲志永  
地址 201702上海市徐涇鎮(zhèn)華徐公路422號  
頒證日  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司  
代理人 徐 迅  
國省代碼 上海;31  
主權(quán)項(xiàng) 一種產(chǎn)生OPG融合蛋白的方法,其特征在于,該方法包括:(a)將編碼OPG、其變體或片段的核苷酸序列和編碼Fc蛋白、其變體或片段的核苷酸序列可操作地連于表達(dá)載體,得到OPG融合蛋白重組表達(dá)載體;(b)將步驟(a)中的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)入甲醇酵母,篩選獲得表達(dá)OPG融合蛋白的工程菌;(c)在合適的條件下發(fā)酵培養(yǎng)步驟(b)獲得的工程菌;(d)從步驟(c)中的發(fā)酵培養(yǎng)產(chǎn)物中純化分離所述融合蛋白;其中,所述融合蛋白的形式為R1-L-R2和R1-R2,其中R1為OPG蛋白、或其變體或片段,R2為Fc蛋白、或其變體或片段,L為接頭;其中,所述OPG蛋白、或其變體、片段選自:(1)SEQIDNO:1所示的OPG蛋白序列;(2)基酸序列22-X,其中X為SEQIDNO:1所示的包括位置185-401的任何殘基;(3)在(2)所述的氨基酸序列前加上Ile-Asp兩個(gè)氨基酸;(4)在(2)所述的氨基酸序列前加上Met;所述Fc蛋白、或其變體或片段選自:(A)SEQIDNO:2所示的氨基酸序列;(B)亞部分(A)的氨基酸序列,在以下一個(gè)或多個(gè)位置具有取代或缺失的不同氨基酸,其中的編號采用SEQIDNO:2的序列編號:i.一個(gè)或多個(gè)半胱氨酸殘基;ii.一個(gè)或多個(gè)氨酸殘基;iii.缺失或用丙氨酸取代位置5的半胱氨酸;iv.缺失或用谷氨酰胺取代位置20的谷氨酸;v.缺失或用丙氨酸取代位置130的谷氨酸;vi.缺失或用丙氨酸取代位置105的賴氨酸;vii.缺失或取代位置107的賴氨酸;viii.缺失N端1-17位的氨基酸序列;ix.取代或缺失一個(gè)或多個(gè)殘基以消除Fc受體結(jié)合位點(diǎn);x.取代或缺失一個(gè)或多個(gè)殘基以消除補(bǔ)體(Clq)結(jié)合位點(diǎn);xi.亞部分i-x的組合。  
摘要 本發(fā)明涉及一種OPG融合蛋白的生產(chǎn)方法和用途,它為R1-L-R2形式,其中R1為OPG蛋白、其變體或片段,R2為Fc蛋白、其變體或片段;L為接頭。本發(fā)明獲得的融合蛋白可用于治療骨質(zhì)疏松和腫瘤相關(guān)骨損失等。  
國際公布  
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