| 公開(公告)號 | CN1229389C |
| 公開(公告)日 | 2005.11.30 |
| 申請(專利)號 | CN03144274.9 |
| 申請日期 | 2003.09.15 |
| 專利名稱 | 純化基因工程重組干擾素的免疫磁性分離技術(shù) |
| 主分類號 | C07K14/555 |
| 分類號 | C07K14/555;C07K1/14 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 南開大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 白 鋼;楊文博;陳家琪;曹 宇;曹學(xué)琳;張 磊 |
| 地址 | 300071天津市衛(wèi)津路94號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 天津市學(xué)苑有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 |
| 代理人 | 解松凡 |
| 國省代碼 | 天津;12 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種純化基因工程重組干擾素的免疫磁性分離技術(shù)，它包括磁性微球的制備、磁性微球的活化、磁性微球的致敏和發(fā)酵菌體裂解液中基因工程重組干擾素的分離純化過程；其特征在于：磁性微球的制備是表面含有羥基活性基團(tuán)的磁性微球，包括反相懸浮包埋法制備的瓊脂糖磁性微球、纖維素磁性微球，和反相懸浮交聯(lián)法制備的聚乙烯醇磁性微球，制備工藝包括下述過程：1)磁流體的制備：取FeCl2·4H2O溶于去離子水中，經(jīng)微孔濾膜過濾除雜質(zhì)，然后加入一定量的聚乙二醇和雙氧水，混勻后用NaOH溶液調(diào)至pH9～11，在50～80℃水浴中反應(yīng)3～6小時，得到棕黑色磁性膠體粒子的穩(wěn)定懸浮液即磁流體；2)瓊脂糖磁性微球的制備：在容器中加入甲苯，四氯化碳以及Span-80，預(yù)熱至50～80℃，作為有機(jī)相；將一定量的磁流體加入到瓊脂糖溶液中，于60～100℃水浴中加熱溶解，并迅速轉(zhuǎn)移至有機(jī)相中，快速攪拌后，迅速冷卻至室溫；最后用乙醚、蒸餾水清洗，經(jīng)篩分處理后，于2～8℃保存?zhèn)溆茫?)聚乙烯醇磁性微球的制備：在容器中加入汽油、四氯化碳以及Span-80混勻，作為有機(jī)相；用蒸餾水配制5～20％的聚乙烯醇溶液，加入一定量的磁流體，冰浴5～20分鐘，加入戊二醛溶液和1NHCl，混勻后迅速倒入有機(jī)相中，充分?jǐn)嚢韬�，緩慢升溫�?0～80℃再繼續(xù)反應(yīng)1～5小時；最后用乙醚、蒸餾水淋洗，經(jīng)篩分處理后，于2～8℃保存?zhèn)溆茫?)纖維素磁性微球的制備：在一定量的纖維素材料中加入10～30％NaOH溶液，浸泡1～4小時，擠去堿液，10～50℃下老化，加入一定量的二硫化碳混勻，密封，10～50℃后繼續(xù)反應(yīng)2～10小時，再加入2～20％NaOH溶液，10～50℃振蕩反應(yīng)2～10小時，得到橙紅色的黃原酸酯粘膠液；在容器中加入氯苯、四氯化碳和油酸鉀，10～50℃水浴，攪拌混勻后，加入一定量溶有磁流體的黃原酸酯粘膠液，充分?jǐn)嚢韬螅郎刂?5～100℃，再繼續(xù)反應(yīng)1～4小時；最后用乙醚、蒸餾水淋洗，經(jīng)篩分處理后，于2～8℃保存?zhèn)溆谩? |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種基因工程重組蛋白的分離技術(shù)，特別是利用免疫磁性分離技術(shù)分離純化基因工程重組干擾素(interferon，IFN)，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明采用不同材料制備含有羥基的磁性微球，經(jīng)環(huán)氧氯丙烷活化后，導(dǎo)入活性氨基，用戊二醛作為連接臂與抗干擾素抗體連接，即得到可用于干擾素分離純化的免疫磁性微球。用該免疫磁性微球和磁性分離裝置對基因工程重組干擾素的發(fā)酵菌體裂解液進(jìn)行分離純化，活性回收率超過50％，純化后的干擾素比活性高于1.0×108IU/mg，SDS-PAGE凝膠電泳分析純度接近100％。 |
| 國際公布 |
