公開(公告)號(hào)
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CN1686540A
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公開(公告)日
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2005.10.26
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200510041858.3
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申請(qǐng)日期
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2005.03.19
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專利名稱
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四價(jià)輪狀病毒滅活疫苗的制備及應(yīng)用
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主分類號(hào)
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A61K39/15
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分類號(hào)
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A61K39/15;A61P31/14
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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蘭州生物制品研究所
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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周 旭
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地址
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730046甘肅省蘭州市城關(guān)區(qū)鹽場(chǎng)路178號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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蘭州中科華西專利代理有限公司
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代理人
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王學(xué)定
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國(guó)省代碼
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甘肅;62
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主權(quán)項(xiàng)
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一種四價(jià)輪狀病毒滅活疫苗的制備方法,包括以下工藝步驟:①細(xì)胞的制備:將小牛腎細(xì)胞或Vero細(xì)胞用胰酶消化分散,加入D-MEM完全培養(yǎng)液在37℃培養(yǎng)至細(xì)胞成片,再用無(wú)血清D-MEM培養(yǎng)液清洗細(xì)胞,用于接種輪狀病毒。②病毒接種和培養(yǎng):將G1型、G2型、G3型、G4型輪狀病毒毒種加入10~15ug/ml胰酶,于37℃消化45分鐘,以感染復(fù)數(shù)為5~10將G1型、G2型、G3型、G4型輪狀病毒分別接種到步驟①制備的細(xì)胞,并在36.5-37.5℃吸附40~60分鐘后吸棄病毒液,再用含1~1.5ug/ml胰酶的無(wú)血清D-MEM培養(yǎng)液于33~35℃培養(yǎng)至細(xì)胞出現(xiàn)明顯病變時(shí)終止;③病毒收集、濃縮和純化:將上述接種的各病變細(xì)胞凍融,高速離心后收集上清液得各病毒原液;通過(guò)超濾濃縮上述病毒原液,并以蔗糖密度梯度離心或柱層析純化病毒后即為各單價(jià)病毒原液。④病毒滅活:采用0.05%福爾馬林或1∶4000β-丙內(nèi)酯滅活上述各單價(jià)病毒,除菌過(guò)濾后即為單價(jià)疫苗原液;⑤混合上述各單價(jià)疫苗原液;⑥成品的配制:將經(jīng)混合的單價(jià)疫苗原液加入適量的氫氧化鋁,即為成品。
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摘要
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本發(fā)明涉及一種四價(jià)輪狀病毒滅活疫苗的制備方法,該方法將胰酶消化分散的小牛腎細(xì)胞或Vero細(xì)胞培養(yǎng)成片后以不同的感染復(fù)數(shù)分別接種G1、G2、G3、G4型輪狀病毒,用無(wú)血清D一MEM培養(yǎng)液至細(xì)胞出現(xiàn)明顯病變后收獲病毒液并經(jīng)濃縮、純化、滅活、混合后加入適量的氫氧化鋁制備而成。本發(fā)明制備的四價(jià)輪狀病毒滅活疫苗經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明具有良好的免疫原性;經(jīng)無(wú)菌試驗(yàn)、病毒滴定、滅活試驗(yàn)、總蛋白含量、硫柳汞含量、氫氧化鋁含量、效力測(cè)定、熱穩(wěn)定性試驗(yàn)、異常毒性檢查、細(xì)菌內(nèi)毒素檢查等檢定完全合格,主要用于預(yù)防嬰幼兒輪狀病毒感染性疾病。
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國(guó)際公布
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