公開(公告)號
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CN1680550A
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公開(公告)日
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2005.10.12
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申請(專利)號
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CN200410018835.6
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申請日期
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2004.04.05
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專利名稱
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一種重組人尿激酶原的純化方法
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主分類號
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C12N9/72
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分類號
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C12N9/72;C07K1/14
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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天津天士力制藥股份有限公司;上海天士力藥業(yè)有限公司
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發(fā)明(設(shè)計)人
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肖成祖;張正光;姜燕;胡顯文;胥照平;李世崇;劉健;高麗華
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地址
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300402天津市北辰科技園區(qū)新宜白大道遼河東路1號
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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代理人
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國省代碼
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天津;12
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主權(quán)項
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一種重組人尿激酶原的純化方法,其特征在于該方法包括如下步驟:A.用陽離子交換Streamline-SP擴張床色譜從工程細胞培養(yǎng)上清中回收重組人尿激酶原;B.用SephacrylS-200凝膠色譜進一步純化上述A收集的尿激酶原粗產(chǎn)品;C.用對氨基苯甲脒-SepharoseFastFlow親和色譜法除去粗產(chǎn)品中的尿激酶;D.用DEAE-SepharoseFastFlow陰離子交換色譜除去重組人尿激酶原中殘留細胞的DNA。
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摘要
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本發(fā)明涉及一種重組人尿激酶原的純化方法,更具體地說是用色譜技術(shù)純化制備重組人尿激酶原的方法。為了解決動物細胞表達的尿激酶原的大規(guī)模純化問題,本發(fā)明公開了一種用Streamline-SP擴張床色譜、Sephacryl S-200凝膠色譜、對氨基苯甲脒Sepharose Fast FlowFlow親和色譜和DEAE-Sepharose Fast Flow陰離子交換色譜法,從哺乳動物工程細胞培養(yǎng)液回收基因工程產(chǎn)品的方法。還可以在步驟C和D之間包括步驟E:用陽離子交換Streamline-SP固定床色譜柱濃縮尿激酶原。采用上述方法得到符合SFDA要求的重組人尿激酶原,總回收率在70%以上,純度達到99%以上。
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國際公布
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