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一種高效快速純化制備片段抗體的方法

公開(公告)號(hào) CN1563090A  
公開(公告)日 2005.01.12  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN200410026022.1  
申請(qǐng)日期 2004.04.07  
專利名稱 一種高效快速純化制備片段抗體的方法  
主分類號(hào) C07K16/18  
分類號(hào) C07K16/18;C07K1/16  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 陳志南  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 米力;唐浩;余曉玲;謝麗  
地址 710032陜西省西安市長(zhǎng)樂西路17號(hào)  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 西安通大專利代理有限責(zé)任公司  
代理人 李鄭建  
國(guó)省代碼 陜西;61  
主權(quán)項(xiàng) 一種高效快速純化制備片段抗體的方法,采用擴(kuò)張柱床吸附——陰離子層析濃縮——疏水層析純化三步純化,從細(xì)胞規(guī)模培養(yǎng)物中分離純化抗體IgG,酶切后純化制備片段抗體,整個(gè)純化工藝的銜接采用同一緩沖系統(tǒng),通過改變pH值的方法進(jìn)行洗脫,減少了工藝過程緩沖系統(tǒng)置換的步驟,其特征在于,包括以下步驟:(1)動(dòng)物細(xì)胞規(guī)模培養(yǎng)物中分離純化抗體IgG,先用StreamlineSP陽(yáng)離子層析吸附動(dòng)物細(xì)胞規(guī)模培養(yǎng)物中的抗體IgG,得到初步純化的抗體IgG,其過程參數(shù)為:a.StreamlineSP陽(yáng)離子層析,動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)物無須澄清和濃縮,用超純水稀釋至電導(dǎo)率為4ms/ml~6ms/ml,吸附條件用緩沖系統(tǒng)(A),直接上樣;b.解吸附條件用緩沖系統(tǒng)(B),直接洗脫,收集洗脫峰;(2)陰離子層析,抗體IgG被充分濃縮純化;蛋白酶酶切獲取F(ab’)2片段;其過程參數(shù)為:a.吸附條件用緩沖系統(tǒng)(B),陽(yáng)離子層析洗脫峰直接上樣;解吸附條件用緩沖系統(tǒng)(A),收集洗脫峰,進(jìn)一步濃縮純化抗體IgG;b.酶切用緩沖系統(tǒng)(A),酶與抗體1∶100(g/g)混合,37℃水浴反應(yīng)0.5h-2h,調(diào)整pH=6-8終止反應(yīng);(3)疏水層析純化片段抗體,其過程參數(shù)為:a.吸附條件用緩沖系統(tǒng)(A)加入0.8-5M硫酸銨,酶切后的樣品同樣處理后上樣,b.解吸附條件用緩沖系統(tǒng)(A)梯度洗脫,收集洗脫峰。  
摘要 本發(fā)明公開了一種從動(dòng)物細(xì)胞規(guī)模培養(yǎng)物中高效快速純化制備片段抗體的方法,采用擴(kuò)張柱床吸附、陰離子層析濃縮、疏水層析純化方法,擴(kuò)張柱床陽(yáng)離子層析吸附大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)物中的抗體IgG,通過改變緩沖系統(tǒng)pH值進(jìn)行洗脫;收集的洗脫峰即可直接進(jìn)行陰離子層析;被充分濃縮純化的抗體IgG,直接被胃蛋白酶酶切獲取片段抗體,進(jìn)行疏水層析純化,最終獲取的片段抗體純度不小于97%,整個(gè)純化過程在12小時(shí)內(nèi)即可完成。純化工藝的銜接采用同一緩沖系統(tǒng),通過改變pH值的方法進(jìn)行洗脫,省去了緩沖系統(tǒng)更換步驟,使前后純化過程銜接緊密;通過陽(yáng)離子-陰離子色譜結(jié)合的濃縮方法替代傳統(tǒng)的硫酸銨沉淀濃縮方法。具有高效、快速、成本低、純度高、穩(wěn)定、批次間結(jié)果差異小等特點(diǎn)。  
國(guó)際公布  
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