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人體心肌肌鈣蛋白Ⅰ的純化方法

公開(公告)號(hào) CN1165548C  
公開(公告)日 2004.09.08  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN00112156.1  
申請(qǐng)日期 2000.03.21  
專利名稱 人體心肌肌鈣蛋白Ⅰ的純化方法  
主分類號(hào) C07K14/435  
分類號(hào) C07K14/435;C07K16/18;C12Q1/28  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 上海潤(rùn)東生物科技有限公司  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 張寄南;蘇恩本  
地址 上海市浦東林路18號(hào)B樓2405室  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 南京天華專利代理有限責(zé)任公司  
代理人 俆冬濤  
國(guó)省代碼 上海;31  
主權(quán)項(xiàng) 人體心肌肌鈣蛋白I的純化方法,其特征在于包含如下步驟:(1)取人體新鮮或速凍冷藏的心肌組織,去脂肪及纖維,經(jīng)勻漿、離心、沉淀、抽提、高鹽溶解等步驟處理后,在層析介質(zhì)為CMSephadex-C50、Cellulose-DE52,緩沖體系為Tris-HCl,pH值為7.2~7.8,尿素含量為6~8mol/L條件下依次進(jìn)行層析,分別收集含心肌肌鈣蛋白C(cTnC)和心肌肌鈣蛋白I(cTnI)的蛋白峰;(2)取上述步驟(1)所得心肌肌鈣蛋白C,在偶聯(lián)溶液為0.1~0.3mol/LNaHCO3,pH值為7.8~8.5,3~6mmol/LCaCl2,平衡緩沖液為45~55mmol/LTris-HCl,8~10mol/L尿素,0.8~1.2mmol/LCaCl2,12~18mmol/L β巰基乙醇,pH值為7.8~8.2的條件下與Sepharose 4B親和層析柱相偶聯(lián),制備成Sepharose 4B親和層析柱;(3)取上述步驟(1)經(jīng)CM Sephadex-C50層析后的粗提品的心肌肌鈣蛋白I峰收集液,再加入步驟(2)所得Sepharose 4B親和層析柱進(jìn)行親和層析,即得純化的心肌肌鈣蛋白I。  
摘要 本發(fā)明公開了人體心肌肌鈣蛋白I的純化和其單克隆抗體的制備方法以及一步法測(cè)定其含量的方法。其特點(diǎn)是采用親和層析法純化人體心肌肌鈣蛋白I,利用該純化的心肌肌鈣蛋白I與BALB/c小免疫制備該心肌肌鈣蛋白I的單克隆抗體,并建立了一步法測(cè)定心肌肌鈣蛋白I含量的方法。其優(yōu)點(diǎn)是所得抗體的同源性好,特異性和敏感性高。其檢測(cè)方法操作簡(jiǎn)單,成本低?蓮V泛用于心臟病的檢查。  
國(guó)際公布  
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