| 公開(公告)號 | CN1523118A |
| 公開(公告)日 | 2004.08.25 |
| 申請(專利)號 | CN03111037.1 |
| 申請日期 | 2003.02.21 |
| 專利名稱 | 一種以結(jié)核桿菌細(xì)胞壁為靶點的藥物篩選方法 |
| 主分類號 | C12Q1/32 |
| 分類號 | C12Q1/32;C12Q1/26;C12Q1/68 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 杜昱光;馬郁芳;陸海峰;趙小明;白雪芳;;李曙光 |
| 地址 | 116023遼寧省大連市中山路457號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 沈陽科苑專利商標(biāo)代理有限公司 |
| 代理人 | 許宗富;周秀梅 |
| 國省代碼 | 遼寧;21 |
| 主權(quán)項 | 一種以結(jié)核桿菌細(xì)胞壁為靶點的藥物篩選方法，其特征在于：在含有50～100mM HEPES(pH7.6)、1～10mM NAD+、100～500nmol dTDP-Glc、4～12μg/ml蛋白的RmlB酶蛋白溶液中加入中藥、藏藥、天然產(chǎn)物的有效成分或組合化學(xué)產(chǎn)物，在25～37℃下培育1～5hr后，再加入1m10.1MNaOH培育10～40min，取出檢測318nm下吸光值的變化，根據(jù)體系吸光值的變化，確定所加入物質(zhì)是否是以結(jié)核桿菌細(xì)胞壁為靶點的藥物。 |
| 摘要 | 本發(fā)明是通過應(yīng)用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)從結(jié)核分枝桿菌基因組文庫中克隆了rmlB基因，其編碼dTDP-D-葡萄糖-4，6-脫氫酶(RmlB)，并在大腸桿菌中表達(dá)了結(jié)核分枝桿菌的RmlB酶蛋白(rmlB是結(jié)核桿菌的生長相關(guān)基因，其基因所表達(dá)的蛋白酶是結(jié)核桿菌細(xì)胞壁形成過程中必須的)，菌株經(jīng)過超聲破碎細(xì)胞，離心，取上清液，利用pET表達(dá)載體上的組氨酸標(biāo)記，采用組氨酸-Ni+親和層析技術(shù)純化得到RmlB酶蛋白，并建立了RmlB酶蛋白的活性測定方法。利用這個酶活性測定方法，根據(jù)加入中藥、藏藥及天然產(chǎn)物的有效成分以及組合化學(xué)產(chǎn)物后RmlB酶蛋白的活性大小或有無建立了抗結(jié)核藥物的模型。 |
| 國際公布 |
