公開(公告)號
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CN1480537A
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公開(公告)日
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2004.03.10
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申請(專利)號
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CN02131070.X
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申請日期
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2002.09.28
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專利名稱
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通過檢測人類T細(xì)胞受體TCR基因在治療前后的變化來評價治療HIV藥物療效的方法
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主分類號
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C12Q1/68
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分類號
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C12Q1/68
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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北京佰仁思生物工程有限責(zé)任公司
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發(fā)明(設(shè)計)人
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寇忠琛
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地址
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102200北京市海淀區(qū)中關(guān)村科技園區(qū)昌平園星火街6號
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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北京匯澤知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
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代理人
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張若華
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國省代碼
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北京;11
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主權(quán)項
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通過檢測人類T細(xì)胞受體TCR基因在治療前后的變化來評價治療HIV藥物療效的方法,其步驟為:a.血樣經(jīng)采集分離后,得到外周血單個核細(xì)胞(PBMC),再進(jìn)一步分離出CD4或CD8T細(xì)胞;b.分離和提純出T細(xì)胞的mRNA后,通過mRNA合成得到cDNA;c.在極其靠近CDR3區(qū)段V基因區(qū)設(shè)計24個內(nèi)側(cè)Vβ基因引物和一個側(cè)Cβ基因引物,C區(qū)基因引物的5′端插入七個非模板堿基(GTTTCTT),Cβ基因引物采用高靈敏度的熒光(6-FAM)標(biāo)記;d.將設(shè)計的引物和由mRNA合成的cDNA通過兩次PCR反應(yīng)來擴(kuò)增cDNA;e.將經(jīng)過兩次PCR反應(yīng)擴(kuò)增并被熒光標(biāo)記的T細(xì)胞受體基因,與甲酰胺混合后94℃變性,將樣本置于含6%丙烯酰胺的測序凝膠中,在DNA測序機(jī)上運行,得到的數(shù)據(jù)用ABIPRISMGeneScan分析軟件進(jìn)行分析和量化,得出藥物療效的評價結(jié)果。
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摘要
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發(fā)明提供一種通過設(shè)計的特定引物來完成PCR反應(yīng),放大感染HIV病毒的患者的T細(xì)胞受體TCR基因在接受藥物治療前后的變化,進(jìn)而評價藥物的療效的方法,本發(fā)明提供的技術(shù)不但填補(bǔ)了技術(shù)上的空白而且具有靈敏度高,準(zhǔn)確性好的優(yōu)點。
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國際公布
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