| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1439424A |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2003.09.03 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN03108006.5 |
| 申請(qǐng)日期 | 2003.04.30 |
| 專利名稱 | 抗非典病毒轉(zhuǎn)移因子的制備方法 |
| 主分類號(hào) | A61K38/02 |
| 分類號(hào) | A61K38/02;A61K35/26;A61K35/28;A61K39/215;A61P31/14;C07K14/495;C07K14/435 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國(guó)人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 許東亮;張國(guó)成 |
| 地址 | 710032陜西省西安市長(zhǎng)樂(lè)西路15號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 李鄭建 |
| 國(guó)省代碼 | 陜西;61 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 抗非典病毒轉(zhuǎn)移因子制備方法，其特征在于，包括以下步驟：1)制備非典病毒抗原將從病人呼吸道分泌物中分離獲得的非典病毒，接種于已長(zhǎng)成單層的Hep-2細(xì)胞、人胚腎細(xì)胞、人胚肺細(xì)胞或雞胚，37℃孵育，每天觀察細(xì)胞病變情況，當(dāng)CPE出現(xiàn)+++時(shí)或經(jīng)病毒抗原檢測(cè)陽(yáng)性；收集細(xì)胞及上清，經(jīng)病毒滅活后超聲打碎，放冰箱冰凍保存；或按非典病毒基因序列用基因工程方法表達(dá)制備保護(hù)性抗原；2)以蔗糖沉層濃縮，以不連續(xù)梯度密度離心純化病毒抗原將超聲打碎的抗原5000rpm離心20min，棄去沉渣留上清，裝入以15％、30％、45％及60％的蔗糖制備的不連續(xù)梯度密度離心管，超速離心，165000×g、3h，根據(jù)病毒的分子量確定該病毒所在離心管位置，吸出冰凍保存?zhèn)溆谩?)用所提取的病毒抗原免疫動(dòng)物挑選健康哺乳動(dòng)物，取上述制備的病毒抗原免疫動(dòng)物，共免疫5～6次，前兩次分別以完全佛氏佐劑及不完全佛氏佐劑混合抗原，以高速組織勻漿機(jī)打勻，在動(dòng)物皮內(nèi)或皮下多點(diǎn)注射免疫，第3次以后在動(dòng)物的肌肉或靜脈注射，每次免疫間隔一周，最后一次免疫7天后取動(dòng)物靜脈血，以免疫熒光方法或ELISA方法檢測(cè)上述病毒的特異性抗體效價(jià)，出現(xiàn)病毒特異性免疫效價(jià)后，宰殺動(dòng)物，取脾及淋巴結(jié)節(jié)組織，低溫冰凍保存?zhèn)溆茫?)從免疫動(dòng)物中提取抗非典病毒轉(zhuǎn)移因子病毒免疫的動(dòng)物脾及淋巴結(jié)組織，去其表面的筋膜、脂肪等組織，滅菌生理鹽水反復(fù)沖洗，剪碎，經(jīng)組織勻漿機(jī)高速粉碎，反復(fù)凍融4～6次，每次融化后均再以組織勻漿機(jī)高速勻漿粉碎，然后以超濾或透析的方法提取抗非典病毒轉(zhuǎn)移因子。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開(kāi)了一種抗非典病毒轉(zhuǎn)移因子制備方法，首先，非典病毒經(jīng)Hep-2細(xì)胞、人胚腎細(xì)胞、人胚肺細(xì)胞或雞胚培養(yǎng)增殖，制備非典病毒抗原以及根據(jù)非典病毒的基因序列用基因工程方法表達(dá)制備的保護(hù)性抗原。其次，以不連續(xù)梯度密度離心純化病毒抗原，或以20％蔗糖沉層濃縮抗原。然后，用所提取的病毒抗原免疫動(dòng)物。最后，從免疫動(dòng)物中提取抗非典病毒轉(zhuǎn)移因子。本發(fā)明的抗非典病毒轉(zhuǎn)移因子藥物通過(guò)增強(qiáng)呼吸道的免疫殺傷細(xì)胞特異性殺傷功能及調(diào)節(jié)粘膜免疫機(jī)制，能夠起到預(yù)防及治療上述病毒感染的作用，可以制備成注射液或滴鼻液藥物，具有既可預(yù)防，又可治療，標(biāo)本兼治的特點(diǎn)。 |
| 國(guó)際公布 |
