| 公開(公告)號 | CN101012271A |
| 公開(公告)日 | 2007.08.08 |
| 申請(專利)號 | CN200710010200.5 |
| 申請日期 | 2007.01.24 |
| 專利名稱 | 一種從制備海藻酸鹽微膠囊的廢棄物中回收蛋白的方法 |
| 主分類號 | C07K1/36(2006.01)I |
| 分類號 | C07K1/36(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 大連理工大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 修志龍;張 杰;李曉輝 |
| 地址 | 116024遼寧省大連市甘井子區(qū)凌工路2號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 大連理工大學(xué)專利中心 |
| 代理人 | 侯明遠(yuǎn);李寶元 |
| 國省代碼 | 遼寧;21 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種從制備海藻酸鹽微膠囊的廢棄物中回收蛋白的方法，其特征在于，該方法按下列步驟進(jìn)行： 1)將制備的含海藻酸鹽微膠囊的凝膠液，按照藥物制劑的實(shí)際要求，采用篩分法、離心沉降法和旋風(fēng)分離法中的一種或者一種以上任意組合，分離出液相、符合制劑要求的微膠囊以及未達(dá)到制劑要求的微膠囊； 2)對步驟1)所得液體，采用超濾、透析和凝膠層析方法中的一種或者一種以上任意組合對其進(jìn)行濃縮和脫鹽處理； 3)對步驟1)所得的未達(dá)到制劑要求的海藻酸鹽微膠囊，按照微膠囊∶破囊液重量比為1∶20～1∶50的比例，加入濃度為0.05～0.2mol/L的破囊液后，靜置8～24h，其中破囊液為檸檬酸鹽、磷酸鹽、EGTA和乳酸鹽中的一種； 4)對步驟3)所得液體先在1000～10000rpm下離心5～20min，所得上清液在靜置或超聲的條件下進(jìn)行鹽析沉淀后，再在1000～10000rpm下離心5～20min，其中鹽析所使用的鹽類為30％～100％飽和度的硫酸銨、硫酸鈉(鉀)、氯化鈉(鉀)、硫酸鎂中的一種； 5)離心分離得步驟4)中的沉淀，用生理鹽水、0.05～0.2mol/L的Tris-HCl和0.05～0.2mol/L的PBS中的一種或者一種以上任意組合的緩沖液溶解后，再經(jīng)過0.45～0.22μm的微孔濾膜過濾； 6)將步驟5)所得的液體上凝膠層析柱，流動相選用與步驟6)中溶解沉淀時(shí)相同的緩沖液，以0.1～1mL/min的流速，檢測并收集蛋白的吸收峰，凝膠層析的介質(zhì)可視回收蛋白的性質(zhì)不同，選用相應(yīng)顆粒大小的葡聚糖、瓊脂糖或聚丙烯酰胺中的一種； 7)將步驟6)收集到的液體，采用超濾、透析和凝膠層析方法中的一種或者一種以上任意組合進(jìn)行濃縮和脫鹽處理。 |
| 摘要 | 一種從制備海藻酸鹽微膠囊的廢棄物中回收蛋白的方法，屬于生物分離工程領(lǐng)域，涉及到蛋白分離、純化技術(shù)。本發(fā)明的技術(shù)特征是將含蛋白的凝膠化溶液與不符合制劑要求的微膠囊分離開來，對含蛋白的凝膠液進(jìn)行濃縮、脫鹽；而不符合制劑要求的微膠囊中加入破囊液后，分別在靜置或超聲的條件下，通過鹽析沉淀的方法，從制備海藻酸鹽微膠囊的廢棄物中分離出蛋白，并采用凝膠層析的方法進(jìn)一步純化和濃縮目的蛋白。本發(fā)明的效果和益處是采用重復(fù)性好、不破壞蛋白類藥物的生物活性、易于操作和工業(yè)放大的方法直接從載蛋白類藥物海藻酸鈣微膠囊中分離、回收蛋白，提高了蛋白類藥物的利用率，大大降低了蛋白類藥物傳遞系統(tǒng)的生產(chǎn)成本。 |
| 國際公布 |
