斷乳豬多系統(tǒng)消耗綜合征的病原學(xué)介紹?
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1 病原學(xué)1.1 形態(tài)及分類 圓環(huán)病毒是一種小的、二十面體對(duì)稱、無(wú)囊膜、單股環(huán)狀DNA病毒，直徑14～17 nm，是目前發(fā)現(xiàn)的最小的動(dòng)物病毒。PCV2屬圓環(huán)病毒科、圓環(huán)病毒屬。1974年，德國(guó)人Tischer發(fā)現(xiàn)，在多株連續(xù)傳代的PK-15細(xì)胞中存在一種類似小RNA病毒的圓形小顆粒病毒，該病毒可持繼感染PK-15細(xì)胞，但不引起CPE。1982年，他證實(shí)并命名為豬圓環(huán)病毒。1997年，Allan用從PMWS病料中分離到的病毒接種未感染的 PK-15，結(jié)果分離到圓環(huán)病毒，稱它為PCV2，而將以前從 PK-15中分離到的圓環(huán)病毒稱為Ⅰ型(PCV1)。目前所分離到的PCV2各毒株，用單克隆或多克隆抗體檢查，在抗原上都“相似”。在Genbank上發(fā)表的各毒株的同源性介于91.1%～100%，AA保守性在90.2%～100%之間，相對(duì)較保守。1.2 理化性質(zhì) 關(guān)于PCV2理化性質(zhì)的報(bào)道較少。PCV在CSCL中的浮密度為1.37 g/cm3，沉降系數(shù)為52 S。PCV對(duì)外界環(huán)境及各種
消毒藥抵抗力較強(qiáng)，在pH值為3 的酸性環(huán)境中很長(zhǎng)時(shí)間不被滅活，56 ℃不能滅活，70 ℃能存活15～30 min，對(duì)苯酚、季胺類化合物、氫氧化鈉和氧化劑等較敏感[4,5]，對(duì)氯仿不敏感。美國(guó)愛(ài)阿華州大學(xué)對(duì)11 種消毒藥品所作的獨(dú)立的研究表明，Virkon S(1∶100)對(duì)PCV2及其協(xié)同抗原PPV有很強(qiáng)的殺滅作用[6]。1.3 PCV2的分子生物學(xué)特征 PCV2有兩種基因組，一種1767，一種1768，目前分離到的各毒株間同源性均在95%以上。PCV1與PCV2同源性為68%。PCV2共有11 個(gè)閱讀框(表1)，這些閱讀框表現(xiàn)為基因重疊，從而充分利用了PCV有限的遺傳物質(zhì)。11 個(gè)閱讀框中 ORF1、5、7、10 的‘5―3’方向相同，ORF2、3、4、6、8、9、11 的‘5―3’方向相同，有學(xué)者認(rèn)為 ORF1、2、3、6、7有一定的同源性，其余ORFS無(wú)任何的同源性。ORF2編碼234 個(gè)AA，編碼蛋白是PVC2囊膜的主要結(jié)構(gòu)成分，Liu Q等用免疫熒光方法和位點(diǎn)突變分析方法研究了PCV2-ORF2在細(xì)胞中的定位，發(fā)現(xiàn)ORF2N端第12～18 個(gè)，第34～41 個(gè)AA域在PCV2在細(xì)胞核內(nèi)定位中起著重要作用。Truong等利用免疫相關(guān)性B-細(xì)胞表位，借助于ELISA確定了ORF2編碼蛋白(CAP)的兩個(gè)抗原表位，分別位于其所編碼的AA的69～83 處和117～131處，這兩處對(duì)于CAP是特異的。所以他將ORF2抗原表位作為自然感染豬及試驗(yàn)
豬血清學(xué)檢測(cè)的標(biāo)志 。Liu Q等將ORF2基因連接到MBP-His(8)-TAG基因3’端，在大腸桿菌中表達(dá)了ORF2融合蛋白，該融合蛋白可以與PCV2抗血清反應(yīng)，這表明可以用ORF2 來(lái)區(qū)分PCV1與PCV2。將PCV2的ORF2克隆到桿狀病毒表達(dá)載體上，在昆蟲細(xì)胞內(nèi)以該基因進(jìn)行表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物的分子量為30 Kd，與從純化的病毒粒子中檢測(cè)到的蛋白大小相似，在電鏡下能觀察到ORF2蛋白可以自我裝配成病毒衣殼樣顆粒。ORF1是最大的閱讀框，編碼315 個(gè)AA，編碼病毒的復(fù)制蛋白(REP)，分子量大小為37 Kd，與病毒的復(fù)制轉(zhuǎn)錄有關(guān)[7,8]。1.4 PCV2的復(fù)制方式及培養(yǎng)特性 研究證實(shí)，PCV的復(fù)制方式為滾環(huán)式，先復(fù)制出一個(gè)RF(復(fù)制型)，然后由雙鏈RF轉(zhuǎn)錄和編碼蛋白。PCV2能在PK-15細(xì)胞上生長(zhǎng)，不能引起細(xì)胞病變。感染的PK-15細(xì)胞內(nèi)含有許多胞漿內(nèi)包涵體，少數(shù)感染細(xì)胞內(nèi)有核內(nèi)包涵體。Allan(1997)報(bào)道，在接種PCV的PK-15細(xì)胞培養(yǎng)物中加入300 mm的D-氨基
葡萄糖-HCL作用30 min，可以促進(jìn)PCV的復(fù)制。PCV不能在原代胎
豬腎細(xì)胞、恒河猴腎BHK-21細(xì)胞上生長(zhǎng)。有報(bào)道，PCV也能在Vero細(xì)胞及其他豬源代細(xì)胞糸上生長(zhǎng)。
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圓環(huán)病毒2型
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圓環(huán)病毒2
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