雞新城疫病毒為有囊膜的負(fù)鏈RNA病毒。NDV基因組編碼6種
結(jié)構(gòu)蛋白:L蛋白為RNA依賴聚合酶,與核衣殼相聯(lián);HN~具有血凝素和神經(jīng)氨酸酶活性,構(gòu)成副粘病毒二種纖突中的大纖突;F為融合蛋白,構(gòu)成小的纖突;NP為核衣殼蛋白;P為磷酸化的核衣殼相聯(lián)蛋白;M為基質(zhì)蛋白,是構(gòu)成囊膜的支架。其中的融合蛋白是NDV的功能性糖蛋白之一,在致病和免疫應(yīng)答過程中起重要作用,已成為研究NDV致病性的熱點(diǎn),為了使大家對(duì)NDV的F蛋白有個(gè)整體的認(rèn)識(shí),現(xiàn)綜述如下。
1、F蛋白的
結(jié)構(gòu) F基因全長1662bp,單一的開放閱讀框編碼553個(gè)
氨基酸的多肽,單體的分子量為65KD,能夠相互交聯(lián)形成寡聚體,NDV的F蛋白主要寡聚體的分子量為195KD,次要寡聚體的分子量為130KD。F蛋白具有3個(gè)大約由25個(gè)疏水氨基酸區(qū)域:一個(gè)在N端信號(hào)肽序列內(nèi)(1-32),一個(gè)在F0裂解產(chǎn)生的F1多肽N端(117-142),該序列能啟動(dòng)病毒與宿主細(xì)胞的膜融合,還有一個(gè)靠近F1的C末端,它使該蛋白能嵌入病毒囊膜中(500-525),在這三個(gè)功能區(qū)中,與糖蛋白功能結(jié)構(gòu)有重要關(guān)系的6個(gè)潛在糖基化位點(diǎn)分別位于85,191,366,447,471和541殘基處。F蛋白還有3個(gè)相當(dāng)保守的抗原位點(diǎn),分別位于343(I-Leu),72(Ⅱ-Asp)161(Ⅲ-Tbr)。有證據(jù)表明,3個(gè)抗原位點(diǎn)中任何一個(gè)位點(diǎn)的氨基酸發(fā)生變化,都將引起其抗原位點(diǎn)的變化,從而引起折疊蛋白的空間變化,影響抗體與該位點(diǎn)的結(jié)合。F蛋白先以無活性的F0蛋白形式存在,糖蛋白F0必須由宿主細(xì)胞蛋白酶裂解為F1和F2后,才發(fā)揮融合作用。如果未能裂解,即產(chǎn)生非感染性病毒粒子。胰蛋白酶可以裂解所有新城疫病毒的F0,體外處理非感染性病毒可以恢復(fù)其感染性,正常情況下在細(xì)胞培養(yǎng)中不能正常增殖或產(chǎn)生蝕斑,在瓊脂培養(yǎng)液中加入胰蛋白質(zhì)酶即可以產(chǎn)生蝕斑,這就很明顯地說明了F0裂解的重要性。
2、F蛋白的功能
F蛋白具有誘導(dǎo)細(xì)胞融合破壞細(xì)胞的作用。F蛋白包括極狀疏水區(qū)(位于F蛋白末端)和幾個(gè)亮氨酸折疊區(qū)(HR區(qū))。F0有一個(gè)多基部式序列,包含一個(gè)C端螺旋結(jié)構(gòu)區(qū)(AAH)和HR區(qū)。AAH區(qū)一端與融合蛋白區(qū)連接,另一端與跨膜區(qū)相連。不同毒株的AAH區(qū)有差異,AAH區(qū)與蛋白成熟有密切關(guān)系。F蛋白的N端有一段可被切割的信號(hào)肽序列,這一序列能夠引導(dǎo)新生的多肽鏈穿過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜,并通過C端疏水性的終止轉(zhuǎn)移域或跨膜域?qū)⑿律逆滀伓ㄔ谀ぶ,因此引起病毒包膜與細(xì)胞膜及細(xì)胞膜之間的融合,故稱為融合肽。F蛋白質(zhì)的融合肽位于F1蛋白中,具有一個(gè)HR區(qū)。HR1位于融合C端,而HR2連接跨膜區(qū),具有一個(gè)折疊五周的螺旋體。HR區(qū)亮氨酸的改變對(duì)于F蛋白融合特性有較大的影響,但并不影響細(xì)胞的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)及蛋白的低糖基化。保守亮氨酸在細(xì)胞融合中是必要的,但不是糖基化分子所必要的。通過改變F1非保守區(qū),變異F1蛋白的膜融合能力沒有較大的改變,這說明HR保守區(qū)其有與細(xì)胞膜相融合和促進(jìn)細(xì)胞融合的作用。應(yīng)該指出F蛋白單獨(dú)表達(dá)并不能完成這一過程,需要和同源性HN共同表達(dá)時(shí)才能顯示出融合細(xì)胞活性,而和異源性HN共同表達(dá)時(shí)卻不能引起細(xì)胞融合,這表明F和HN的相互作用具有極強(qiáng)的特異性。改變F蛋白酶識(shí)別的酶切位點(diǎn),在不加
胰酶時(shí)不能誘導(dǎo)形成較大的合胞體,加入胰酶消化后,變異蛋白能誘導(dǎo)形成較大的合胞體,但胰酶消化的正常F蛋白不能增加細(xì)胞融合的能力。
3、F蛋白裂解位點(diǎn)處氨基酸序列與毒力強(qiáng)弱的關(guān)系
在距F0氨基端100個(gè)氨基酸處有一個(gè)主要由
精氨酸和
賴氨酸組成的酶切位點(diǎn),不同毒力的毒株之間F蛋白的F1/F2多肽裂解位點(diǎn)(112-117氨基酸殘基)存在重要的差異,序列
分析表明該區(qū)域重要氨基酸序列的變異與NDV毒力強(qiáng)弱直接相關(guān),因?yàn)樵撐稽c(diǎn)氨基酸的組成和排列決定了F蛋白的裂解活性,所有強(qiáng)毒株的位點(diǎn)氨基酸殘基為112Arg-Arg-Gln-Lys/Arg-Arg-Phe117,而所有弱毒株在該位置氨基酸的序列為112Gly-Arg/Lys-Gly-Gly/Ser-Arg-Leu117,兩種情況都是在1.17位前裂解開的,強(qiáng)毒株的F蛋白具有被
谷氨酰胺(Gln)分開的兩對(duì)堿性氨基酸(Lys)或精氨酸(Arg),因而能在多種細(xì)胞系中被裂解開;緊接著在該結(jié)構(gòu)之后是苯丙氨酸(Phc),是F2多肽N末端的標(biāo)志。相反,弱毒株則沒有堿性氨基酸對(duì),而且在112-115殘基處均為甘氨酸(Gly),F(xiàn)2多肽的N末端為亮氨酸(Leu),就是由于強(qiáng)毒株含有格外的堿性氨基酸,所以它可以被多種宿主組織或器宮中的蛋白酶裂解,而弱毒株僅在有胰酶類似的部分增殖,所以感染往往是局部的。
4、F蛋白在遺傳學(xué)分群方面的應(yīng)用
毒株的變異多集中在F基因編碼區(qū)前段序列內(nèi)(1-142殘基),該區(qū)包括:信號(hào)肽序列(9-25氨基酸殘基)、切割活性序列(112-116氨基酸殘基)和部分融合誘導(dǎo)疏水區(qū)(117-142氨基酸殘基)。信號(hào)肽在F蛋白合成后不久就被切下來,它不是功能性F蛋白的構(gòu)成成分。F蛋白基因的47-420氨基酸殘基之間序列具有高度的可變性,該區(qū)域稱為F蛋白的可變區(qū)。對(duì)可變區(qū)的限制性酶切位點(diǎn)進(jìn)行
分析,可以把它作為NDV毒株遺傳學(xué)分群的重要指標(biāo)。1995年Ballagi-Pordang等利用限制性酶切分析對(duì)NDV200多個(gè)毒株進(jìn)行了遺傳學(xué)分群,通過實(shí)驗(yàn)將NDV毒株主要分為6個(gè)遺傳群,即遺傳群Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ。1997年lomnjczj等又報(bào)道了遺傳群
Ⅶ,在南非60年代分離的已被公認(rèn)的毒株的后代中發(fā)現(xiàn)了遺傳群Ⅷ。曹殿軍等在對(duì)我國部分地區(qū)NDV分子
bhskgw.cn/shouyi/ya/guanli/流行病學(xué)的研究中發(fā)現(xiàn)我國特有的基因
Ⅸ型,并把基因型Ⅶ分為5個(gè)基因亞型,分別為Ⅶa、Ⅶb、Ⅶc、Ⅶd、Ⅶe,這些分析結(jié)果和ND的流行規(guī)律非常吻合,因此已經(jīng)成為ND分子流行病學(xué)調(diào)查的一種有效手段。
綜上所述,F(xiàn)蛋白一方面具有誘導(dǎo)細(xì)胞融合而破壞細(xì)胞的作用,而它本身又具有良好的免疫原性,所以可以利用其免疫原性制成多肽疫苗,從而保護(hù)靶細(xì)胞免受病毒的侵染,現(xiàn)在已有應(yīng)用F蛋白特異性抗體預(yù)防新城疫的報(bào)導(dǎo);另一方面,F(xiàn)蛋白的不同基因型在對(duì)分析ND的流行規(guī)律方面的作用是不容忽視的,F(xiàn)蛋白是研究NDV功能最重要的對(duì)象之一。
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