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概述
禽流行性感冒(AvianInfluenza，AI)是由A型流感病毒引起的一種禽類的感染和/或疾病綜合征。感染后的禽可表現(xiàn)出臨診癥狀：呼吸系統(tǒng)疾病、產(chǎn)蛋量下降、致死率很高的急性出血性疾病，也可表現(xiàn)為亞臨診癥狀：輕的呼吸系統(tǒng)感染到無癥狀帶毒(隱性感染)等多種流行形式。疾病的嚴(yán)重程度取決于病毒毒株的毒力、被感染的禽種、有無并發(fā)病及其他條件而不同。1878年，首次報(bào)道在意大利雞群暴發(fā)的一種嚴(yán)重疾病，當(dāng)時(shí)稱為雞瘟(FowlPlague)，即所謂的‘真性雞瘟或歐洲雞瘟’。1955年證實(shí)‘雞瘟’的病原為A型流感病毒感染。1981年在美國馬里蘭州召開的首屆禽流感學(xué)術(shù)會(huì)議上建議取消‘雞瘟’這一病名，改稱高致病性禽流行性感冒，并建議用標(biāo)準(zhǔn)操作程序來確定分離毒是否屬于HPAI病毒。至今，該病幾乎遍及世界各地。世界各地已分離出上千株的禽流感病毒。病毒廣泛分布于各種家禽(火雞、雞、珍珠雞、石雞、鵪鶉、野雞、鷓鴣、鴿、鵝及鴨)和野禽(包括鴨、鵝、磯鷸、燕鷗、鷺、海鷗、天鵝等)。從遷徙水禽，尤其鴨中分離的病毒最多，流感在家禽中對(duì)雞和火雞的危害最嚴(yán)重。禽流感暴發(fā)造成的損失是巨大的，近年來國外及我國有不少禽流感感染人的報(bào)道，人感染后的癥狀主要表現(xiàn)為高熱、咳嗽、流涕、肌痛等，多數(shù)伴有嚴(yán)重的肺炎，嚴(yán)重者心、腎等多種臟器衰竭導(dǎo)致死亡，病死率很高。因此本病倍受人們關(guān)注。
禽流感：出現(xiàn)明顯神經(jīng)癥狀，共濟(jì)失調(diào)、震顫、偏頭、扭頸
病原
(一)分類及命名
禽流感病毒為正粘病毒科流感病毒屬的成員，根據(jù)流感病毒核蛋白(NP)和基質(zhì)蛋白(MS)抗原性的不同，可將流感病毒分為A、B和C3個(gè)血清型。A型流感病毒能感染多種動(dòng)物，包括人、禽、豬、馬、海豹等；B型和c型則主要感染人。而且A型流感病毒的表面糖蛋白比B型和c型的變異性高。
根據(jù)流感病毒的血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)的抗原性差異，可將A型流感病毒分為不同的亞型。迄今為止，A型禽流感病毒的HA已發(fā)現(xiàn)14(或16)種，NA有9(或10)種，分別以H1～H14、N1～N9命名。不同的H抗原或N抗原之間無交叉反應(yīng)。
所有的禽流感病毒均屬A型。不同毒株的致病性有差異。根據(jù)A型流感各亞型毒株對(duì)禽類的致病力的不同，將禽流感病毒分為高致病性病毒株、低致病病毒株和不致病病毒株。歷史上高致病性的禽流感病毒都是由H5和H7引起的。當(dāng)然，并非所有的H5和H，都是強(qiáng)毒。證明為高致病的毒株還是少數(shù)。因此，須以國際公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)來鑒定分離毒株是否為高致病性禽流感病毒株(HPAIV)。
禽流感：腹腔內(nèi)有新破裂的卵黃，卵泡變形，充血
OIE根據(jù)科學(xué)家的建議，推薦的鑒定標(biāo)準(zhǔn)：
1．將無菌有感染性的雞胚尿囊液1：10稀釋后，每只0．2ml靜脈或肌肉注射8只4～8周齡易感雞，接種后10天內(nèi)死亡率≥75％，可認(rèn)定為高致病性禽流感病毒。
2．分離物符合上述標(biāo)準(zhǔn)后，其他雞群即可依據(jù)流行病學(xué)、l臨診癥狀及相同亞型血凝素抗體測定來確定是否為感染高致病性的禽流感病毒。
3．如果致病力試驗(yàn)中致死率不足75％，或血凝素為H5及H，亞型的病毒，需要進(jìn)一步的試驗(yàn)和驗(yàn)證。
4．如果分離的禽流感病毒只能致死8只中的1～5只，但能在沒有胰蛋白酶的存在的細(xì)胞培養(yǎng)物(CEF細(xì)胞)上生長，并能產(chǎn)生細(xì)胞病變(CPE)或形成蝕斑，則必須先測定其HA相關(guān)多肽的氨基酸序列后，才能宣布該分離物是否為高致病性毒株。
5．對(duì)所有低致病性的H5、H7毒株，血凝素切割位點(diǎn)的氨基酸序列與高致病性禽流感病毒一致。
毒株的命名包括：型別/宿主/分離地點(diǎn)/毒株序號(hào)/分離年代(血凝素亞型和神經(jīng)氨酸酶亞型)，如A/turkey/Ontario/7732/66(H5N9)。
A型流感病毒的另一特點(diǎn)就是病毒的遺傳變異。由于流感病毒的基因組是由8個(gè)單鏈的RNA片斷組成，在病毒增殖過程中很容易發(fā)生基因重排，使流感病毒的抗原性和致病性發(fā)生變異�？乖宰儺愂茿型流感病毒常見的一種自然變異。變異率最高的是HA，其次是NA。這兩種抗原變異可獨(dú)立發(fā)生，有時(shí)只涉及一個(gè)(HA或NA)，有時(shí)兩個(gè)同時(shí)發(fā)生變異。抗原變異可分為抗原漂移(Antigenicdrift)和抗原轉(zhuǎn)移(Antigenicshift)。
A型流感病毒有8個(gè)基因組片段，當(dāng)兩個(gè)或兩個(gè)以上不同的病毒粒子同時(shí)感染一個(gè)宿主細(xì)胞時(shí)，在病毒增殖過程中，不同毒株的8個(gè)基因片段可隨機(jī)重新組合。據(jù)知，A型流感病毒的HA已鑒定出16種，NA有10種。如果HA和NA基因隨意重排，則可產(chǎn)生160種不同亞型的流感病毒。如果兩個(gè)不同毒株的流感病毒同時(shí)感染同一個(gè)動(dòng)物細(xì)胞時(shí)，通過基因片段的重排可能裝配成256種遺傳學(xué)不同的子代病毒。這種基因重排有可能產(chǎn)生高致病力的毒株，有些是無致病力的。
另外，來自不同宿主的病毒也易發(fā)生基因置換，病毒的這一特性，加之易感動(dòng)物的復(fù)雜、多種，使本病的防制更加困難。
禽流感：肝臟腫大，出血，顏色發(fā)綠，呈古銅色
(二)病毒的理化特性
流感病毒具有多形性，典型的A型流感病毒粒子呈球形，直徑100nm左右。有些毒株呈長短不一的絲狀，長者可達(dá)數(shù)微米。
病毒具有囊膜，囊膜上有12～14nm的纖突，有兩種不同類型即HA和NA。病毒的核衣殼呈螺旋對(duì)稱，核酸為單股負(fù)鏈RNA，可分成8個(gè)片段，總長約13.6kb，分別編碼不同的病毒蛋白。
禽流感病毒的囊膜表面具有血凝素(HA)，能凝集多種動(dòng)物的紅細(xì)胞，并能被特異的抗血清所抑制。禽流感病毒凝集的紅細(xì)胞種類與雞新城疫病毒凝集的種類有所不同，以此可鑒別兩種病毒。
流感病毒有囊膜，對(duì)乙醚、氯仿、丙酮等脂溶劑敏感。20％乙醚4℃處理2h可使病毒裂解，但血凝滴度不受影響。常用消毒藥容易將其滅活，如福爾馬林、β-丙內(nèi)酯、去氧膽酸鈉、稀酸、氨離子、鹵素化合物(如漂白粉和碘劑等)、重金屬離子等都能迅速破壞其傳染性。
流感病毒對(duì)熱也比較敏感，56℃加熱30min、60℃加熱lOmin、65～70℃加熱數(shù)分鐘即喪失活性。
病毒對(duì)低溫抵抗力較強(qiáng)，在有甘油保護(hù)的情況下可保持活力數(shù)月或1年以上。該病毒對(duì)凍融作用較穩(wěn)定，但反復(fù)凍融的次數(shù)過多，最終會(huì)使病毒滅活。
直射陽光下40～48h即可滅活該病毒。如果用紫外線直接照射，可迅速破壞其感染。
在自然條件下，存在于鼻腔分泌物和糞便中的病毒，由于受到有機(jī)物的保護(hù)，具有極大的抵抗力。據(jù)報(bào)道，在雞淘汰105天后，仍可從雞舍濕糞便中分離到具有傳染性的病毒。糞便中病毒的傳染性在4℃可保持30～35天之久，20℃可存活7天。堆積發(fā)酵的糞便中10～20天，可將HPAIV全部滅活。在羽毛中存活18天，在干骨頭或組織中存活數(shù)周，在冷凍的禽肉和骨髓中可存活10個(gè)月。在自然環(huán)境中，特別是涼爽和潮濕的條件下可存活很長時(shí)間，�？梢詮挠兴莸暮春统靥林蟹蛛x到流感病毒。據(jù)估計(jì)流感病毒可在冰凍的池塘中越冬，但在夏季或沒有水禽活動(dòng)的池塘水中，病毒不能長期存活。
禽流感：肝臟腫大，有灰白色壞死灶
(三)已知禽類分離毒株
目前在世界各地分離到的禽類流感病毒達(dá)千種以上，至少在50種禽類中發(fā)現(xiàn)了流感病毒或其抗體。
流行病學(xué)
分布禽流感病毒呈世界性分布。易感動(dòng)物家禽和野禽、鳥類都對(duì)禽流感病毒敏感。家禽中火雞、雞、鴨是自然條件下最常受感染的禽種。
感染途徑和傳播方式家禽流感的傳染來源較多，可來自感染或發(fā)病的家禽、其他種類的家禽，來自外來捕獲的鳥、野生鳥類、移徙的水禽及其他動(dòng)物。
病毒通過病禽的分泌物、排泄物和尸體等污染飼料、飲水及其他物體，通過直接接觸和間接接觸發(fā)生感染，呼吸道和消化道是主要的感染途徑。人工感染途徑包括鼻內(nèi)、氣管、結(jié)膜、皮下、肌肉、靜脈內(nèi)、口腔、腹腔、氣囊、泄殖腔、顱內(nèi)及氣溶膠等途徑均獲成功。
由于感染能從糞便中大量排出病毒，污染一切物品，如飼養(yǎng)管理器具、設(shè)備、授精工具、動(dòng)物、飼料、飲水、衣物、運(yùn)輸車輛等均可成為病原的機(jī)械性傳播媒介。人員的流動(dòng)與消毒不嚴(yán)可起著非常重要的傳播作用。
禽流感的發(fā)病率和死亡率受多種因素影響，既與禽的種類及易感性有關(guān)，又與毒株的毒力有關(guān)，還與年齡、性別、環(huán)境因素、飼養(yǎng)條件及水平以及并發(fā)疾病(常有大腸桿菌病及雞新城疫的參與)有關(guān)。
還應(yīng)了解，流感病毒的變異率很高，即使同一毒株也會(huì)在短時(shí)內(nèi)發(fā)生變異。
禽流感：病雞精神沉郁，雞冠發(fā)紫，出血，壞死。左為對(duì)照
臨床癥狀
禽流感(AI)的潛伏期從幾小時(shí)到幾天不等，其長短與病毒的致病性高低、感染強(qiáng)度、傳播途徑和易感禽的種類有關(guān)。
由A型AIV所引起的禽流感，因感染禽的種類、年齡、性別、并發(fā)感染情況及所感染毒株的毒力和bhskgw.cn/shouyi/niu/jibing/其他環(huán)境因素等不同而表現(xiàn)出的癥狀很不一致。
病禽主要表現(xiàn)為呼吸道、消化道、生殖道及神經(jīng)系統(tǒng)的癥狀。一般說來，沒有特征性的癥狀。病禽呈現(xiàn)體溫升高，精神沉郁，羽毛松亂，喜臥不動(dòng)，飲食欲減少。母雞產(chǎn)卵量下降，下降幅度不等，畢英佐等1994年報(bào)道，下降15％～35％；張澤紀(jì)等報(bào)道，產(chǎn)蛋下降14％～75％。呼吸道癥狀表現(xiàn)明顯，如咳嗽、噴嚏、羅音，呼吸困難，重者張口呼吸或有尖叫聲。病禽流淚，羽毛松亂，身體蜷縮。頭和顏面部水腫、冠和肉垂發(fā)紺。有神經(jīng)癥狀，共濟(jì)失調(diào)，不能走動(dòng)和站立。有的見下痢。以上這些癥狀可能單獨(dú)出現(xiàn)，或幾種同時(shí)出現(xiàn)。
當(dāng)出現(xiàn)急性暴發(fā)時(shí)，沒有明顯癥狀即可見到雞只死亡。因毒株的致病力不同，死亡率從0％～100％不等。同時(shí)，不同種類的禽種易感性也不同，如H5N8亞型對(duì)火雞致病，對(duì)鴨則不致病。野生鳥類的流感病毒感染，一般沒有明顯癥狀，但燕鷗感染A/tern/SouthAfrica/1/61(H5N3)時(shí)可引起大量死亡。
禽流感：病雞輸卵管水腫，有白色粘稠分泌物
病理變化
禽流感的病理變化因感染病毒株毒力的強(qiáng)弱、病程長短和禽種的不同而變化不一。
高致病性AIV的主要特征是暴發(fā)時(shí)的突然死亡和高死亡率。其組織病變主要是壞死，而且嚴(yán)重并涉及到腦、皮膚及多個(gè)內(nèi)臟器官。
與此相反，由低毒力毒株引起的蛋雞及火雞的AIV流行主要臨診特征是：死亡率無明顯升高，而產(chǎn)蛋率、受精率及孵化率下降。最常見的大體病變是卵巢退化、出血和卵子破裂，內(nèi)臟的尿酸鹽沉積(內(nèi)臟型痛風(fēng))，腎臟腫大，肺充血和水腫，氣管炎，腸炎及氣囊炎。其他常見的變化是輸卵管發(fā)炎，‘蛋性腹膜炎’(Eggperitonitis)，腎小管壞死，肝臟壞死及肺炎，說明低毒力株主要侵害泌尿生殖道。
禽流感：病雞腿部出血、有出血點(diǎn)或出血斑
(一)肉眼病變
在很多病情較輕的病例中，大體病變往往不太明顯�？赡苡休p微的竇炎，表現(xiàn)為卡他性、纖維素性、漿液性/纖維素性、膿性或干酪性炎癥。氣管粘膜有輕度水腫，并有數(shù)量不等的漿液性或干酪樣滲出物。氣囊炎，表現(xiàn)囊壁增厚，或有纖維素性及干酪樣滲出物。病禽還可見纖維素性腹膜炎及‘蛋性腹膜炎’�；痣u還能見到卡他性或纖維素性腸炎和盲腸炎。蛋雞的卵泡變形、萎縮，輸卵管也可見到滲出物。
如果感染高致病性毒株，因死亡很快，可能見不到明顯的病變。但有些毒株也可引起某些非特征性的充血、出血及局部壞死等病變，如A/turkey/Ontario/7732/66(H5N9)、A/tem/SouthAfrica/61(H5N3)及A/chicken/Pennsylvania/83(H5N2)等毒株。病變還可包括頭面部水腫，竇炎和肉垂、冠發(fā)紺、充血。內(nèi)臟的變化差異較大。人工感染禽流感病毒(H7N7)可見到肝、脾、腎的壞死灶，有些毒株(H5N3)則沒有前述變化。
部分毒株除產(chǎn)生頭部水腫、發(fā)紺外，內(nèi)臟還可見到較明顯的出血，包括漿膜及粘膜面的小點(diǎn)出血；十二指腸和心外膜出血；肌胃與腺胃交接處的乳頭及粘膜嚴(yán)重出血；扁桃體腫大及出血。
(二)病理組織學(xué)變化
禽流感的特征性病理組織學(xué)變化為水腫、充血、出血和‘血管套’(血管周圍淋巴細(xì)胞聚積)的形成，主要表現(xiàn)在心肌、肺、腦、脾等。肝、脾及腎有實(shí)質(zhì)性變化和壞死。腦的變化包括：壞死灶、血管套、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞增生等從輕微到嚴(yán)重的非化膿性腦炎。此外．還有嚴(yán)重的壞死性胰腺炎和心肌炎。
禽流感：病雞腺胃乳頭出血潰瘍，粘膜上附有膿性分泌物。腺胃肌層出血，肌胃內(nèi)膜易剝離，皺褶處有出血斑
診斷鑒別
對(duì)禽流感及時(shí)而正確的診斷十分重要，以能采取果斷的控制措施。本病必須進(jìn)行綜合分析，尤以實(shí)驗(yàn)室診斷最為重要。
(一)現(xiàn)場診斷
根據(jù)流行病學(xué)，臨診癥狀及剖檢變化只能作出可疑診斷。由于禽流感的現(xiàn)場表現(xiàn)(發(fā)病特點(diǎn)、癥狀及剖檢變化)差異較大且無典型性，所以要確診必須依靠病原分離鑒定及血清學(xué)試驗(yàn)。
禽流感：產(chǎn)薄皮、軟皮和畸形及白皮蛋
(二)病原分離、鑒定
A型流感病毒常在呼吸道或/和消化道中復(fù)制增殖，所以，活禽采集病料多從喉頭、氣管或泄殖腔中采集。死禽采集氣管、肺、肝、脾、腎等組織樣品。
以棉花或其他材料制成的拭子、器具采集病料樣品，放入加抗生素的無菌肉湯或20％～50％甘油生理鹽水中。最好低溫(4℃)或-70℃下保存，以液態(tài)氮或干冰較好。病料樣品在保存或運(yùn)送前可先行處理，制成10％的懸液，并進(jìn)行低速離心澄清。
經(jīng)離心的病料上清液接種SPF雞胚，取0．1ml，經(jīng)尿囊腔途徑接種(或同時(shí)羊膜腔接種)9～11日齡的雞胚，置37℃孵育3～7天，棄去24h內(nèi)死亡的胚，收集48h至96h的胚液和絨毛尿囊膜作無菌檢查，檢查雞胚尿囊液對(duì)紅細(xì)胞的凝集活性，血凝陰性者，用尿囊液盲傳2～5代，如仍未出現(xiàn)血凝時(shí)，判為陰性，棄去。如出現(xiàn)血凝活性則進(jìn)一步檢查。
一般說來，如果樣品中有病毒存在，初次傳代后就足以產(chǎn)生紅細(xì)胞凝集作用。出現(xiàn)血凝活性的病毒量一般為10-5～10-6EID50/ml。
用于病毒鑒定的標(biāo)準(zhǔn)方法是以雞紅細(xì)胞來檢測胚液的血凝活性，常量法和微量法都可便用。
確定尿囊液或其他胚液的血凝活性后，還要鑒別是否由副粘病毒雞新城疫病毒(NDV)所致。因此，首先要用ND抗血清作HI試驗(yàn)，以排除NDV的可能性。如果NDVHI陰性，才可以進(jìn)行下一步工作，即確定A型流感病毒NP抗原的存在�？捎醚鍖W(xué)方法，如雙向雙擴(kuò)散、免疫電泳、或單輻射溶血試驗(yàn)等方法來檢測型特異性的核心抗原NP或MP。A型流感病毒都具有相同的型特異性抗原。
鑒定程序下一部工作是確定血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)這兩種表面抗原的亞型。用一系列制備好的抗不同血凝素的抗血清以HI試驗(yàn)來測定其HA的型別。
NA亞型通常用制備的抗9種(或10種)已知神經(jīng)氨酸酶的抗血清鑒定。微量神經(jīng)氨酸酶抑制試驗(yàn)(NI)操作更簡便。已知目前的HA亞型達(dá)16種，NA也達(dá)了10種亞型。
目前國內(nèi)只有極少數(shù)實(shí)驗(yàn)室具備鑒定的條件，可將待檢材料送往有條件的專業(yè)實(shí)驗(yàn)室去進(jìn)行病毒分型鑒定。
禽流感：呈明顯的心包炎病理表現(xiàn)
(三)血清學(xué)試驗(yàn)
1．血凝試驗(yàn)與血凝抑制試驗(yàn)用血凝試驗(yàn)和血凝抑制試驗(yàn)(HI)可證實(shí)流感病毒的血凝活性及排除NDV。簡單的方法是：取1滴1：10稀釋的正常雞血清(最好是SPF雞)和1滴ND抗血清，分別滴于瓷板上，再各加1滴有血凝活性的雞胚尿囊液，混勻后各加1滴5％的雞紅細(xì)胞懸液，若兩份血清均出現(xiàn)血凝現(xiàn)象，則表明尿囊液中不含有新城疫病毒(NDV)；如果ND抗血清出現(xiàn)HI現(xiàn)象，表明尿囊液中含NDV。
血凝和血凝抑制試驗(yàn)操作相對(duì)繁雜一些，加上需制備抗血清，所以也較費(fèi)時(shí)間。但特異性較好，是亞型鑒定中必須進(jìn)行的項(xiàng)目。用于型的鑒定就不如瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)?zāi)菢雍啽愫涂旖荨?/P>
2．瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)在瓊脂凝膠中進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)比較簡便、快捷，既可以定性(如免疫雙擴(kuò)散及免疫電泳中以沉淀線判定)，又可以定量(如單輻射擴(kuò)散)。
瓊脂擴(kuò)散(AGP)試驗(yàn)最常用的是雙向雙擴(kuò)散(或稱免疫雙擴(kuò)散)。即用已知的陽性和陰性血清與待檢抗原及已知抗原，在瓊脂凝膠中進(jìn)行免疫雙擴(kuò)散。室溫下作用24h，已知抗原和陽性血清之間應(yīng)出現(xiàn)明顯的沉淀線，48h內(nèi)都應(yīng)很清晰。當(dāng)待檢抗原與陽性血清間出現(xiàn)沉淀線，并且沉淀線與鄰近的陽性抗原和抗血清的沉淀線相連，即可判定為陽性反應(yīng)，待檢抗原即為A型禽流感病毒。這是國內(nèi)目前普遍采用的方法。
除了雙向雙擴(kuò)散試驗(yàn)(IDD)外，在凝膠中進(jìn)行的免疫沉淀試驗(yàn)還有：免疫單輻射擴(kuò)散試驗(yàn)(SRD)，即制膠時(shí)先加入抗原或抗體的一種，而讓另一種在凝膠中進(jìn)行擴(kuò)散。這種方法還可以定量測定抗原或抗體的量。這種方法還可以稱作被動(dòng)溶血試驗(yàn)，即單輻射溶血試驗(yàn)(SRH)，此時(shí)凝膠中要加入紅細(xì)胞，在補(bǔ)體存在下抗原抗體復(fù)合物使沉淀環(huán)出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，也可對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定量。
免疫電泳試驗(yàn)也可用于AIV及其抗體的檢測，使用較多的是對(duì)流免疫電泳(CIE)。
幾種方法相比較，免疫雙擴(kuò)散(IDD)要比SRD更簡便一些，但其敏感性不如SRD好。但SRD需對(duì)抗原進(jìn)行裂解處理，操作較為復(fù)雜。SRH的敏感性類似SRD，比IDD要高，但操作更復(fù)雜，其優(yōu)點(diǎn)在于可定量分析。
對(duì)流免疫電泳(CIE)是這幾種方法中最為敏感的一種，而且操作簡單，時(shí)間最快，1h即可出結(jié)果。
3．中和試驗(yàn)以中和試驗(yàn)（NT)來鑒定或滴定流感病毒時(shí)。常用雞胚或組織培養(yǎng)細(xì)胞，操作方法與其他病毒（如NDV)的中和試驗(yàn)相同。
中和試驗(yàn)作為經(jīng)典的方法在病毒鑒定中是相當(dāng)重要的，很多新的檢測方法都要以之為標(biāo)準(zhǔn)來進(jìn)行比較。但其操作相當(dāng)繁瑣，所費(fèi)時(shí)間也較長，試驗(yàn)材料耗費(fèi)也多，故不常進(jìn)行。
4.免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù)即熒光抗體技術(shù)，最早用于流感病毒是鑒定和定位病毒感染細(xì)胞中特異性的抗原，主要是流感病毒的NP或MP抗原。用NP抗原的熒光抗體染色，主要出現(xiàn)核內(nèi)熒光；用抗原的熒光抗體主要出現(xiàn)胞質(zhì)熒光，核內(nèi)也有部分熒光。
用于禽流感病毒的診斷，常用直接熒光抗體法，即在組織觸（印)片上直接染色，以熒光顯微鏡檢查熒光，一種AIV的熒光抗體可以用來檢測同亞型的其他病毒。熒光抗體技術(shù)用干診斷，具有快速、簡便、敏感等特點(diǎn)，而且費(fèi)用較低。需要注意的是，如何避免或降低標(biāo)本中出現(xiàn)的假陽性問題（非特異性熒光)。
5．酶免測定技術(shù)酶免測定技術(shù)（EnzymeImmunoAssays)，也稱酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA)，是用酶來標(biāo)記抗原或抗體，通過顯色反應(yīng)來檢測相應(yīng)抗體或抗原的一種方法。
ELISA具有較高的敏感性，既可以檢測抗體，又可以檢測抗原。尤其適合于大批樣品的血清學(xué)調(diào)查。可以標(biāo)準(zhǔn)化而且結(jié)果易于分析。在流感的控制、撲滅、檢疫中很有用途。
試驗(yàn)表明，直接ELISA可于感染后6天檢出AIV的抗體，敏感性也高于AGP及HI試驗(yàn)。
簡單程序（直接ELISA)為；從感染尿囊液中超速離心制備抗原，以抗原包被酶標(biāo)反應(yīng)板，加人待檢血清后，再加入抗抗體（酶標(biāo))，最后以酶標(biāo)儀檢測結(jié)果。
中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所于已開發(fā)出ELISA和Dot-ELISA診斷試劑盒可供診斷用。
6．聚合酶鏈反應(yīng)（PCR)農(nóng)業(yè)部動(dòng)物檢疫所吳時(shí)友等建立了從病料中核測AIV的PCR方怯。哈爾濱獸醫(yī)研究所于康震等也建立了PCR和反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RTPC)診斷法。PCR方法敏感性較高，為AIV從病料中快速檢出提供了方法。
禽流感：雞冠發(fā)紅或紫紺
(四)病理組織學(xué)見病理變化部分。
(五)鑒別診斷
由于禽流感感染引起的流行特點(diǎn)、癥狀及病理變化與某些禽病相似，必須作出區(qū)別診斷，如雞新城疫、傳染性支氣管炎、傳染性喉氣管炎、傳染性鼻炎、支原體病、衣原體病、產(chǎn)蛋下降綜合征等；特別是某些疾病的混合感染或繼發(fā)感染，使病情更為復(fù)雜，給診斷帶來困難或容易發(fā)生誤診，因此，類癥鑒別診斷十分重要。
首先是與新城疫的區(qū)別診斷，由于禽流感與雞新城疫的癥狀、病變很相似。一般來說，禽流感的潛伏期和病程比國內(nèi)目前發(fā)生的新城疫為短，新城疫病雞的呼吸困難、嗉囔和口中的積液、呼吸困難時(shí)的咕咕叫聲、典型神經(jīng)癥狀等各種表現(xiàn)、常規(guī)的典型病變都較禽流感明顯和具有特征性，加之，現(xiàn)場新城疫的緊急免疫效果等，都與禽流感不同。但兩病的準(zhǔn)確區(qū)別診斷，只能依靠實(shí)驗(yàn)室的診斷，最簡便、實(shí)用的方法是病毒分離和血凝抑制試驗(yàn)(HI)，ND抗血清抑制不了AIV的血凝作用，反之亦然。
禽流感與其他幾種疫病的鑒別，作者認(rèn)為根據(jù)流行特點(diǎn)、癥狀、病理剖檢和實(shí)驗(yàn)室檢查(病原學(xué)、血清學(xué))等綜合分析，是可以區(qū)別開的。同樣，繼發(fā)或并發(fā)細(xì)菌病時(shí)，通過病原分離工作便可確定。
總之，對(duì)禽流感的診斷，實(shí)驗(yàn)室病毒的分離、鑒定，以及致病性試驗(yàn)都耗時(shí)較長，化費(fèi)也較高，只有極少數(shù)的實(shí)驗(yàn)室能進(jìn)行此項(xiàng)檢查，在收到檢查樣品后不能在較短時(shí)間(48h)內(nèi)作出確診，確診滯后于現(xiàn)場采取措施的要求。禽流感這類疫病的確診越快、越早，損失就越小。如果，分離物鑒定為高致病的禽流感強(qiáng)毒，則要求發(fā)病現(xiàn)場采取及時(shí)、果斷的撲滅措施；如分離物鑒定為中等毒力或低致病的禽流感病毒，則要求發(fā)病現(xiàn)場采取可行的控制措施；如分離物鑒定為無毒力的禽流感病毒，則需觀察其流行動(dòng)態(tài)。A型禽流感病毒血清亞型的變異監(jiān)測也是應(yīng)該重視的內(nèi)容。
禽流感：雞腿鱗片發(fā)紅
防治措施
禽流感是世界性分布的疫病，對(duì)該病的防制各個(gè)國家都很重視，我國應(yīng)該從多方面采取嚴(yán)加防范的措施，否則，該病一旦爆發(fā)，造成的經(jīng)濟(jì)損失將是無法估計(jì)，對(duì)養(yǎng)禽業(yè)可造成毀滅性的打擊。
1．防止AI從國外傳入我國。
預(yù)防和控制禽流感，一定要嚴(yán)防高致病性禽流感病毒從國外傳入。海關(guān)應(yīng)對(duì)進(jìn)口的禽類，包括家禽、野禽、觀賞鳥類及其產(chǎn)品進(jìn)行嚴(yán)格檢疫，把好國門關(guān)。
2．一旦發(fā)生可疑禽流感時(shí)，要組織專家及早確診，鑒定所分離的禽流感病毒的血清亞型、毒力和致病性。劃定疫區(qū)，嚴(yán)格封鎖，撲殺所有感染HPAIV的禽類并進(jìn)行徹底的消毒，按照我國動(dòng)物衛(wèi)生法和農(nóng)業(yè)部的要求，嚴(yán)格執(zhí)行防疫措施。
3．各地在引進(jìn)禽類及其產(chǎn)品時(shí)一定要來自無禽流感的養(yǎng)禽場。
4．對(duì)查出血清學(xué)陽性的養(yǎng)禽場，一定要采取可行的措施，加強(qiáng)監(jiān)測，密切注視流行動(dòng)向，防止疫源擴(kuò)散。
5．未有本病發(fā)生的地區(qū)和養(yǎng)禽場，應(yīng)加強(qiáng)獸醫(yī)衛(wèi)生和檢疫工作，定期檢測禽群，防止禽流感的傳人和發(fā)生。
6．對(duì)禽流感目前沒有切實(shí)的特異治療方法。流行過程中不主張治療，以免使疫情擴(kuò)鹽酸金剛烷胺有一定效果，但并不確定。應(yīng)用抗生素主要是防止和減輕細(xì)菌性并發(fā)和感染。其他也多是對(duì)癥療法。
7．疫苗的應(yīng)用并不廣泛，因?yàn)锳IV的血清亞型較多，缺乏明顯的交叉保護(hù)作用，而異性很大，況且免疫會(huì)干擾、影響檢疫和撲滅工作，也可能會(huì)誘發(fā)病毒的突變。據(jù)于介紹，哈爾濱獸醫(yī)研究所根據(jù)各國暴發(fā)的高致病力禽流感均是由Hs和H7亞型病毒，以及我國1-19亞型的存在，現(xiàn)已開展H5、H7和H9亞型禽流感疫苗的研究。
禽流感：拉黃色稀糞便
禽流感：卵巢變形，呈束帶樣表現(xiàn)
禽流感：氣管粘膜出血
禽流感：腎臟可見點(diǎn)狀壞死灶及出血
禽流感：腎腫大有尿酸鹽，出血、肺出血
禽流感：輸卵管內(nèi)有白色膿性分泌物或塊狀物
禽流感：腺胃乳頭出血
禽流感：禽流感：腺胃乳頭出血
禽流感：腫頭、雞冠萎縮發(fā)青
