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免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗:第二節(jié) 巨噬細胞功能的檢測

人巨噬細胞可從外周血或經(jīng)斑蝥激發(fā)的皮皰液中獲取,也可從肺灌洗液或患者腹膜透析液中分離,但操作繁鎖,得量不多。許多實驗室在進行基礎(chǔ)或配合臨床研究巨噬細胞功能及其與疾病的關(guān)系、或篩檢免疫增強藥物和探討其作用機制時,常選用小鼠腹腔巨噬細胞為研究對象,常用的…

人巨噬細胞可從外周血或經(jīng)斑蝥激發(fā)的皮皰液中獲取,也可從肺灌洗液或患者腹膜透析液中分離,但操作繁鎖,得量不多。許多實驗室在進行基礎(chǔ)或配合臨床研究巨噬細胞功能及其與疾病的關(guān)系、或篩檢免疫增強藥物和探討其作用機制時,常選用小鼠腹腔巨噬細胞為研究對象,常用的檢測方法如下。

(一)炭粒廓清試驗

正常小鼠肝中枯否細胞可吞噬清除90%炭粒,脾巨噬細胞約吞噬清除10%炭粒,據(jù)此給小鼠定量靜脈注射印度墨汁(炭粒懸液),間隔一定時間反復(fù)取靜脈血,測定血中炭粒的濃度,根據(jù)血流中炭粒被廓清的速度,判斷巨噬細胞的功能。

(二)吞噬功能的檢測

巨噬細胞具有較強的吞噬功能,實驗室常用比細菌大的細胞性抗原作為被吞噬顆粒,如雞紅細胞。其檢測原理是將受檢細胞與適量的顆?乖旌虾,置37℃保溫0.5~1h,其間時加振搖,最后離心取測定細胞制成涂片,染色鏡檢,分別計數(shù)出吞噬百分比和吞噬指數(shù)。各實驗室應(yīng)根據(jù)自己的條件建立正常參考值。

(三)巨噬細胞溶酶體酶的測定

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巨噬細胞富含溶酶體酶,如酸性磷酸酶、非特異性酯酶、溶菌酶等,測定這些酶的活性也是衡量巨噬細胞功能的實用指標之一。

1.酸磷酸酶的測定

(1)硝酸法:本法優(yōu)點是用普通試劑,價格便宜,一般實驗室均有條件做,封片后可較長時間保存,并可用電子顯微鏡研究觀察細胞的超微結(jié)構(gòu)。缺點是細胞必需固定,而且固定條件要求嚴格,如處理不當酶活性易消失,反應(yīng)步驟也較多。

該法基本原理是在適當?shù)拿感詶l件下,巨噬細胞內(nèi)的酸性磷酸酶能使β甘油磷酸鈉水解成磷酸鹽后,后者與硝酸鉛反應(yīng)產(chǎn)生磷酸鉛,而磷酸鉛再與硫酸銨反應(yīng)則形成黑色硫化鉛,沉積在胞漿內(nèi)酸所在處,顯示棕黑色顆粒。酶活性強弱可根據(jù)顆粒的數(shù)量和粗細不同而分級判斷,顆粒數(shù)量少則細的為+,顆粒多而粗的為++,顆粒很多且很粗的為+++。

(2)偶氮法:本法操作簡便,反應(yīng)液中的底物α-萘磷酸鈉被酸性磷酸酶分解后,形成萘酚和磷酸鹽,而萘酚結(jié)構(gòu)中的羥基(-OH)鄰近的活潑碳原子,立即與偶氮染料起反應(yīng),而產(chǎn)生鮮艷的棕色沉積在酶所在處,缺點是封片后保存時間短。

2.非特異性酶的測定該酶比較穩(wěn)定,酶活性喪失較慢,細胞經(jīng)涂片干燥,置室溫至少可保存半天至一天,因此特別有利于臨床檢驗室采用。

常用α-萘醋酸法,該酶可將-萘醋酸分解成萘酚和醋酸,萘酚迅速與偶染料結(jié)合,形成有色反應(yīng)物而沉積。

(四)巨噬細胞促凝血活性測定

激活巨噬細胞可產(chǎn)生一種與膜結(jié)合的凝血活性因子,加速正常血漿的凝固,為此取已經(jīng)37℃預(yù)溫的正常血漿和CaC12混合液,加入經(jīng)粘附單層巨噬細胞的試管中,移置37℃,即時記錄血漿凝固時間。實驗證明當巨噬細胞與LPS、腫瘤相關(guān)抗原或HbsAg等溫育后,可見血漿凝固時間明顯縮短。本法穩(wěn)定方便,也是檢測不同疾病患者巨噬細胞功能的指標之一。

(五)巨噬細bhskgw.cn胞表面受體的檢測

成熟的巨噬細胞表面具有Fc受體和C3b受體,這些受體能識別經(jīng)IgG和C3b調(diào)理的顆粒,并迅速與之結(jié)合,促使細胞對相應(yīng)顆粒的吞噬,為此檢測這些受體可間接判斷巨噬細胞的功能。常用抗羊紅細胞致敏的羊紅細胞懸液作指示物進行EA花環(huán)試驗,也可用抗原(E)抗體(A)補體(C)復(fù)合物作EAC花環(huán)試驗。由于操作繁鎖,現(xiàn)僅供研究用。

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