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免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn):第三節(jié) 免疫金銀染色

免疫金銀染色(immunogoldsilverstaining,IGSS)是在金免bhskgw.cn/jianyan/疫技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的更為敏感的技術(shù),由Holgate在1983年首先建立成功。一、原理bhskgw.cn/yishi/金免疫技術(shù)測(cè)定的產(chǎn)物上的金顆?蓪€y離子還原成銀顆粒,在金顆粒表面形成一色澤…

免疫金銀染色(immunogoldsilverstaining,IGSS)是在金免bhskgw.cn/jianyan/疫技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的更為敏感的技術(shù),由Holgate在1983年首先建立成功。

一、原理

bhskgw.cn/yishi/金免疫技術(shù)測(cè)定的產(chǎn)物上的金顆?蓪€y離子還原成銀顆粒,在金顆粒表面形成一色澤更深的黑色層,因而增強(qiáng)了金免疫技術(shù)的敏感性(圖19-3)。

圖19-3 免疫金銀染色原理示意圖

二、方法

IGSS的主要試劑為銀染液。以往一般用硝酸銀染液,但其對(duì)光的穩(wěn)定性較差;改用乙酸銀溶液后穩(wěn)定性加強(qiáng),配方如下:

A液:0.22%乙酸銀溶液(乙酸銀110mg溶于去離子水50ml中)。

B液:50%阿拉伯樹膠溶液(阿拉伯樹膠50g溶于去離子水100ml中,每天振搖3次,5天后過濾使用)。

C液:1%對(duì)苯二酚溶液(對(duì)苯二酚500mg溶于0.55mol/LpH3.8的檸檬酸鹽緩沖液50ml中)。

D液:在C液中加入B液10~40ml。

使用前將A液和D液等量混合,即為銀染液。

IGSS多用于組織化學(xué)檢測(cè)。對(duì)于以膜為載體的免疫學(xué)試驗(yàn),金染色后的銀加強(qiáng)可按下法進(jìn)行:將膜用0.05mol/LpH8.2TBS浸洗3次,每次3min,用去離子水沖洗一次,浸入0.05mol/LpH3.8檸檬酸緩沖液平衡5min,浸入銀染液中,37℃25min。將膜取出,用去離子水沖洗,放入定影液1min,去離子水沖洗,空氣干燥。

三、應(yīng)用

金免疫技術(shù)的敏感度低于其它標(biāo)記免疫技術(shù),經(jīng)銀加強(qiáng)染色后敏感度可與熒光免疫技術(shù)和酶免疫技術(shù)相當(dāng)。因此近年來發(fā)展了不少IGSS方法以替代熒光免疫技術(shù),可以在普通顯微鏡下進(jìn)行檢測(cè)。

在以膜為載體的免疫技術(shù)(如免疫印跡法)中,也有應(yīng)用IGSS以替代酶免疫法。也有用金標(biāo)記抗體代替酶標(biāo)記抗體進(jìn)行類似ELISA的測(cè)定,最后進(jìn)行銀加強(qiáng),其敏感度與ELISA相仿。

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