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實(shí)用免疫細(xì)胞與核酸:第一節(jié) 概述

聚合酶鏈反應(yīng)或多聚酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction, PCR),又稱(chēng)無(wú)細(xì)胞克隆技術(shù)(“free bacteria”cloning technique),是一種對(duì)特定的DNA片段在體外進(jìn)行快速擴(kuò)增的新方法。該方法一改傳bhskgw.cn/wszg/統(tǒng)分子克隆技術(shù)bhskgw.cn的模式,不通過(guò)活細(xì)胞,操…

聚合酶鏈反應(yīng)或多聚酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction, PCR),又稱(chēng)無(wú)細(xì)胞克隆技術(shù)(“free bacteria”cloning technique),是一種對(duì)特定的DNA片段在體外進(jìn)行快速擴(kuò)增的新方法。該方法一改傳bhskgw.cn/wszg/統(tǒng)分子克隆技術(shù)www.med126.com的模式,不通過(guò)活細(xì)胞,操作簡(jiǎn)便,在數(shù)小時(shí)內(nèi)可使幾個(gè)拷貝的模板序列甚至一個(gè)DNA分子擴(kuò)增107~108倍,大大提高了DNA的得率。因此,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用到分子生物學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域。

PCR技術(shù)最早由美國(guó)Cetus公司人類(lèi)遺傳研究室Kary Mullis及同事于1985年發(fā)現(xiàn)并研制成功的;最早的應(yīng)用報(bào)道是Saiki等1985年將PCR技術(shù)應(yīng)用于β-珠蛋白基因擴(kuò)增和鐮刀狀紅細(xì)胞貧血的產(chǎn)前診斷。隨后使用了1976年Chien等分離的熱穩(wěn)定性Taq DNA聚合酶,使PCR操作大為簡(jiǎn)化,并使PCR自動(dòng)化成為可能;1987年Kary Mullis等完成了自動(dòng)化操作裝置,使PCR技術(shù)進(jìn)行實(shí)用階段。

國(guó)內(nèi)復(fù)旦大學(xué)1988年起開(kāi)始研制耐熱性多聚酶,軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院馬立人教授等在1989年研制成功了PCR自動(dòng)裝置,并且不斷推陳出新,最近研制的PTC-51A/B型DNA熱循環(huán)儀體積小,造型美觀,價(jià)格適宜,操作簡(jiǎn)單,尤為適宜國(guó)內(nèi)應(yīng)用。

PCR發(fā)明不到10年,卻已獲得廣泛應(yīng)用。目前,每年都有上千篇文章 發(fā)表。1991年,期刊“PCR方法與應(yīng)用”(PCr Methods and Application)在美國(guó)創(chuàng)刊,使有關(guān)學(xué)者有了自己的論壇和參考的專(zhuān)業(yè)期刊。PCR技術(shù)作為一種方法學(xué)革命,必將大大推動(dòng)分子生物學(xué)各有關(guān)學(xué)科的研究,使其達(dá)到一個(gè)新的高度。

1993年度諾貝爾化學(xué)將已于10月13日揭曉,Kary Mullis因發(fā)明了“聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)”而獲得此殊榮。現(xiàn)在世界各地都在使用PCR檢測(cè)病人血液中的微量遺傳物質(zhì),這一成就為精確診斷艾滋病及其它病癥鋪平了道路。瑞典皇家科學(xué)院說(shuō):“PCR方法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)中。該方法同DNA測(cè)序法結(jié)合起來(lái)很可能將成為研究動(dòng)植物分類(lèi)學(xué)的一種革新工具!币幻幽么蠹(guó)科學(xué)家Michael Smith因開(kāi)創(chuàng)了“寡核苷酸基因定點(diǎn)誘變”的方法而與Mullis同享此榮。

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