真皮結(jié)締組織由數(shù)量不多的細(xì)胞和豐富的細(xì)胞外基質(zhì)組成。細(xì)胞成分包括成纖維細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和少量淋巴細(xì)胞等。細(xì)胞外基質(zhì)包括：①膠原：真皮中膠原纖維由I型和II型膠原構(gòu)成，成熟真皮中I型膠原約占膠原的85%，越年幼的皮膚含III型膠原的比例越高。②彈性蛋白。③非膠原糖蛋白：如纖維粘連蛋白。④蛋白聚糖：為氨基聚糖（亦稱糖胺聚糖)與核心蛋白質(zhì)構(gòu)成的共價化合物。其中氨基聚糖可分為透明質(zhì)酸、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、硫酸角質(zhì)素、肝素和硫酸乙酰肝素等。
真皮纖維化是以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)成分在真皮中過度積聚的結(jié)果。它既見于硬皮病等皮膚病中，還見于皮膚創(chuàng)傷愈合過程中發(fā)生的肥厚性瘢痕和瘢痕疙瘩中。現(xiàn)將免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)在上述常見的真皮纖維化性疾病研究中的應(yīng)用簡介如下：
一、確定細(xì)胞外基質(zhì)成分在真皮的分布
利用各種細(xì)胞外基質(zhì)的抗體，借助免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)對細(xì)胞外基質(zhì)在真皮中的分布進(jìn)行定位，尚可經(jīng)圖像分析系統(tǒng)對染色強(qiáng)度等參數(shù)定量化，所獲得數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理能更準(zhǔn)確地反映細(xì)胞外基質(zhì)分布和含量上的量化差異程度。用ABC法顯示，硬皮病真皮中III型膠原大量沉著，其分布方式與免疫電鏡所見相符，即標(biāo)記III型膠原抗體的細(xì)纖維大量聚積于真表皮交界處基底膜下；而在真皮深部，這種細(xì)纖維與標(biāo)記I型膠原抗體的粗纖維相間分布，形成光鏡下所見的粗大纖維束。纖維粘連蛋白也可大量沉積于硬皮病真皮深層膠原纖維束之間，但有些文獻(xiàn)報道的結(jié)果并不一致。免疫熒光法顯示，纖維粘連蛋白在肥厚性瘢痕和瘢痕疙瘩中量沉積，呈線狀或卷曲排列，其分布符合組織學(xué)上所見結(jié)節(jié) 性結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)。近來用不同蛋白聚糖的單克隆抗體，借助APAAP法發(fā)現(xiàn)，肥厚性瘢痕組織中含有大量4-或6-硫酸軟骨素，只有少量硫酸皮膚素。其中血管周圍浸潤的T淋巴細(xì)胞與4-硫酸軟髓素密切相關(guān)。
二、研究纖維化皮損中細(xì)胞的表型特征和（或)功能狀態(tài)
�。ㄒ�)成纖維細(xì)胞
1．合成功能活躍除了上述對已形成膠原的分布進(jìn)行觀察外，利用抗體I型前膠原氨基末端的單克隆抗體，可確定新合成未加工的I型前膠原。正常人皮膚顯示了真表皮交界部I型前膠原的灶性沉著。而硬皮病皮損及其未受累皮膚中，真皮上部有連續(xù)廣泛的I型膠原著色。這反映了硬皮病成纖維細(xì)胞活躍的合成功能。
2．HLA-II類抗原的表達(dá)正常皮膚及正常瘢痕的成纖維細(xì)胞并不表達(dá)HLA-II類抗原。但在硬皮病、瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕中，可見許多表達(dá)HLA-II類抗原的成纖維細(xì)胞。由于HLA-II類抗原為遞呈特定抗原觸發(fā)免疫應(yīng)答所必需，推測在上述疾病中，表達(dá)HLA-II類抗原的成纖維細(xì)胞參與了局部免疫反應(yīng)。
3．細(xì)胞間粘連分子1型（ICAM-1)的表達(dá)硬皮病炎癥期皮損中可見一些成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞上有ICAM-1的表達(dá)。流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)，與正常成纖維細(xì)胞相比，體外培養(yǎng)的硬皮病成纖維細(xì)胞中高水平表達(dá)ICAM-1的細(xì)胞比例增ICAM-1與淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原1型（LFA-1)是一對配體受體系統(tǒng)，它們可介導(dǎo)成纖維細(xì)胞與T細(xì)胞結(jié)合。高水平表達(dá)ICAM-1的成纖維細(xì)胞可促使擁有LFA-1的MHC-II類限制性T輔助細(xì)胞的活化。推測由此產(chǎn)生能促進(jìn)成纖維細(xì)胞合成細(xì)胞外基質(zhì)成分的細(xì)胞因子。醫(yī).學(xué) 全在.線提供www.med126.com
（二)肌纖維母細(xì)胞
在肥厚性瘢痕以及其它一些病理情況下，存著一種具有成纖維細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)特征的細(xì)胞，即肌纖維母細(xì)胞。其起源尚不明確。利用不同細(xì)胞骨架蛋白（波形纖維蛋白、結(jié)蛋白、α-平滑肌及α-橫紋肌肌動蛋白、非肌性及平滑肌肌球蛋白)的抗體，對肌纖維母細(xì)胞的表型特征進(jìn)行了研究，證實(shí)了異質(zhì)性纖維母細(xì)胞群的存在。其一部分顯示成纖維細(xì)胞的特征，而其余的則顯示有不同程度的平滑肌分化的特征。
�。ㄈ�)單一核浸潤細(xì)胞
在硬皮病、瘢痕疙瘩及肥厚性瘢痕中，常有不同程度單一核浸潤細(xì)胞增加，彌散分布或位于血管周圍。應(yīng)用淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的單克隆抗體檢測發(fā)現(xiàn)，主要為T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。這些細(xì)胞可能通過釋放某些與纖維有關(guān)的細(xì)胞因子而參與真皮纖維化的發(fā)生。此外還發(fā)現(xiàn)，硬皮病皮損中血管周圍浸潤細(xì)胞處有ICAM-1和整合素（integin)β1和β2（細(xì)胞外基質(zhì)在細(xì)胞表面的受體)的免疫染色強(qiáng)度增加。這些細(xì)胞粘連分子在淋巴細(xì)胞遷移、定位以及粘附在細(xì)胞外基質(zhì)上起重要作用。
�。ㄋ�)內(nèi)皮細(xì)胞和肥大細(xì)胞
硬皮病皮損中，內(nèi)皮細(xì)胞上ICAM-1和內(nèi)皮細(xì)胞白細(xì)胞連分子1型（ELAM-1)免疫染色陽性。這兩種分子的表達(dá)是內(nèi)皮細(xì)胞活化的表現(xiàn)，它們可能與淋巴細(xì)胞附著在活化的內(nèi)皮細(xì)胞上有關(guān)。硬皮病、瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕中，肥大細(xì)胞與纖維化也有密切關(guān)系。肥大細(xì)胞（MC)根據(jù)它所含中性蛋白酶的組成和含量可分為兩型，一種含類胰蛋白酶（tryptase)，而胃促胰酶（chymase)含量極少，即MCT；另一種則含這兩種酶，即MCTC。應(yīng)用這兩種酶的單克隆抗體，對硬皮病皮損區(qū)MC的數(shù)量、表型和分布進(jìn)行研究，結(jié)果提示MC參與了該病的發(fā)生。
三、檢測與纖維發(fā)生有關(guān)的細(xì)胞因子
轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β)和血小板衍生的生長因子（PDGF)與纖維化發(fā)生密切相關(guān)。用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)，在硬皮病皮損中檢出了PDGF及其β型受體和TGF-β的存在，在瘢痕疙瘩皮損中也檢出了TGF-β的存在。
四、其它
免疫熒光法是檢測自身抗體的常用方法。系統(tǒng)性硬皮病患者血清中常存在多種自身抗體。在瘢痕疙瘩患者中也發(fā)現(xiàn)了抗成纖維細(xì)胞的抗核抗體。免疫熒光法還顯示，瘢痕疙瘩和肥厚性瘢痕組織中IgM、IgG和IgA水平增高。瘢痕疙瘩與免疫的關(guān)系已引起注意并有待進(jìn)一步研究。
