樣品的正確收集與處理，是蛋白質(zhì)及多肽激素放射免疫分析取得成功的前提。不同的樣品與測(cè)定項(xiàng)目，其前處理有不同的要求。下面以神經(jīng)肽測(cè)定為例，介紹樣品的前處理方法。
一、腦、脊髓與垂體中神經(jīng)肽的提�。ㄒ源笫鬄槔�)
1．大鼠稱(chēng)重后，在盡量安靜的情況下，迅速斷頭、取軀干血。
2．盡快取下全腦、脊髓（某段)與垂體，在沸生理鹽水中煮5min，以滅活酶，保持神經(jīng)肽的穩(wěn)定。
3．根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求分出腦區(qū)（如小腦、橋延腦、下丘腦、中腦或中央灰質(zhì)、丘腦、皮層、海馬、紋狀體等與垂體前葉。
4．腦區(qū)等稱(chēng)重。
5．把腦區(qū)、垂體或脊髓，分別置于玻璃勻漿管內(nèi)，加入1mol/l HAC（或HCl)1ml，充分勻漿后倒入塑料指形管中，在室溫下放置100min，使生物活性物質(zhì)充分溶解在酸中。
6．加入1mol/l NaOH 1 ml，中和酸。
7．離心，取上清。
8．低溫（-20℃以下)保存待測(cè)。
二、大鼠腦神經(jīng)核團(tuán)微穿孔取樣方法（以下丘腦為例)
1．大鼠迅速斷頭，取出全腦，置沸生理鹽水中煮5min。
2．將全腦置于取材角度器上，分別于視交叉前和乳頭體后用雙面刀片垂直切斷，取下丘腦塊。
3．將雙面刀片裝在切片機(jī)上。
4．將下丘腦置于切片機(jī)機(jī)載物臺(tái)上，腹側(cè)向下，并用502膠水固定。在腦塊后方適當(dāng)放置瓊脂塊以利固定。
5．開(kāi)動(dòng)振動(dòng)切片機(jī)，緩慢移動(dòng)推進(jìn)器，切片厚400～500μm。用毛筆沾生理鹽水，小心收集切片置于平皿內(nèi)的生理鹽水中。
6．將腦切片平置于橡皮板上，并在體視顯微鏡下，參照鼠腦立體定位圖譜，確定神經(jīng)核團(tuán)位置。
7．選擇相應(yīng)直徑的穿孔器，分別于兩側(cè)核團(tuán)上垂直插下，然后推出針蕊將所取核團(tuán)組織放入勻漿器中。
8．加入1mol/l HAC 0.5ml, 充分勻漿后倒入放免測(cè)定管中，放置100min。
9．加入1mol/l NaOH 0.5ml中和酸，離心（3000rpm/min)20min，取上清液，低溫保存待測(cè)。
三、內(nèi)臟、腫瘤組織中神經(jīng)肽的提�。ㄒ晕刚衬槔�)
（1)取下胃粘膜后，迅速稱(chēng)重置于試管，中沸蒸餾水1ml，在水浴中煮100min。標(biāo)本在室溫下放置，其中的生物活性物質(zhì)會(huì)被酶降解，所以要立即加熱處理。
�。�2)冷卻后倒入特殊的勻漿器中，充分勻漿（使用電動(dòng)攪拌器)。勻漿液倒入塑料指形管中，再用蒸餾水1ml，沖洗勻漿器，并倒入上述管中。
�。�3)離心，取上清，低溫保存待測(cè)。
四、血漿
1．直接測(cè)定
�。�1)加酶抑制劑：準(zhǔn)確采全血若干毫升，注入預(yù)冷的加有①抗凝劑0.3mol/l EDTA·2Na（乙二胺四乙酸二鈉)溶液（每毫升全血20μl)、或1%肝素（每毫升全血10μl)；②抑肽酶（每毫升全血500單位)的塑料指形管中，迅速低溫離心，取血漿低溫保存待測(cè)。
抑肽酶有液體的（標(biāo)簽寫(xiě)的有每毫升含多少單位)與固體的（每毫升含12TIU，1TIU=900KIU，即每毫克含10800單位)。固體的抑肽酶可用生理鹽水溶解，使之每20μl含500單位。
�。�2)酸化處理：每毫升血漿加1mol/l HCl 0.2ml，低溫保存待測(cè)。測(cè)定前加1mol/l NaOH 0.2ml。
以上兩種方法，任選一種即可。
2．間接測(cè)定血標(biāo)本經(jīng)提取后，可去除蛋白質(zhì)等干擾因素，并使微量的生物活性肽濃縮，但較費(fèi)時(shí)，成本也高。常用的提取方法有：
�。�1)柱層析提取法：有多種層析柱可供提取不同的神經(jīng)肽，其中較為方便的是用Sep-pak C18層析柱提取。主要步驟步：
�、僦念A(yù)處理：該柱有兩頭，長(zhǎng)頭連接注射器，可注入溶液與樣品，短頭為排出口。預(yù)處理時(shí)注入乙腈10ml。蒸餾水20ml，使柱中的生物膠活化。
�、谧⑷霕悠罚ㄈ缪獫{、腦脊液、腹水、尿等)：樣品中的水份流出，生物活性肽、蛋白及雜質(zhì)等吸附在生物膠上。血漿上柱前，如先去除蛋白，可增加柱子的使用時(shí)間。]
③淋洗：用4%HAC溶液100ml注入柱中，以洗去一些雜質(zhì)。
�、芟疵摚河�7ml酸性乙腈（按容積算，每100ml中含有乙腈75ml、HAC4ml、蒸餾水21ml)作為洗脫劑，注入柱中，把生物活性肽洗脫下來(lái)，收集在塑料指形管中。
⑤清洗：用乙腈、蒸餾水清洗柱子，以備后用。
⑥將洗脫液吹干，低溫保存待測(cè)。測(cè)定時(shí)可加入一定量的緩沖液溶解。
Sep-Pak C18柱層析，也可用于制備標(biāo)記抗原時(shí)的層析純化。
�。�2)加膜藻土提取法：
�、俪檠河靡淮涡运芰献⑸淦鞒槿∈茉囌哽o脈血4ml，置于加有肝素（125單位/ml 全血)指形管中。
②分離血漿：在4℃下離心，取出血漿。
�、垩獫{酸化：取2ml血漿，加入1mol/l HCl 0.5ml, 搖勻。
④吸附：加入0.5%藻土懸液2ml，在水平震蕩器上震30min。離心，去上清，留沉淀。
0．5%藻土縣液（Fuller’s earth)的配制：
0.5g Fuller’s earth
0.1g Dextran T70
100ml去離子水
�、菹疵摚涸诔恋砉苤屑尤�80%酸性丙酮1ml，在漩渦振蕩器上振2min，離心，取上清置于經(jīng)硅化的玻管中。
80%酸性丙酮的配制：
80ml丙酮
20ml 1mol/L HCl
�、奕ブ杭尤胧兔�1ml，搖勻，脂肪溶解在石油醚中，分層后吸去上層。
�、吒稍铮合聦右后w，置于37℃水浴中，用氮?dú)猓ɑ蚩諝?吹干。
�、嗟蜏乇４娲郎y(cè)。測(cè)定時(shí)用一定量緩沖液溶解。
�。�3)有機(jī)溶劑提取法：常用的有甲醇、乙醇、乙腈、丙酮等。將溶劑按一定比例，加入標(biāo)本內(nèi)，混勻、振蕩、離心，取上清吹干，冷藏待測(cè)。通常在有機(jī)溶劑中加入適量的酸。
在這些方法中，以柱層析法最穩(wěn)定、準(zhǔn)確，但成本高，推廣不易。加膜藻土法，提取率較高，但操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)。有機(jī)溶劑提取法操作方便，成本也低，雖穩(wěn)定性較差。
