第一部分 細(xì)菌學(xué)
實(shí)驗(yàn)一 顯微鏡的使用
微生物個(gè)體微小，肉眼不能看到，必須借助光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡，將其放大上百倍、上千倍、甚至于上萬(wàn)倍，才能看清。因此，必須熟練掌握光學(xué)顯微鏡的使用和保護(hù)，尤其是油鏡的使用和保護(hù)。
一、光學(xué)顯微鏡(油鏡)的使用與保護(hù)方法
【原理】
光線(xiàn)從標(biāo)本玻片經(jīng)空氣進(jìn)入鏡頭時(shí)，由于介質(zhì)密度不同而發(fā)生折射現(xiàn)象，因此進(jìn)入物鏡中的光線(xiàn)很少。當(dāng)使用高倍或低倍物鏡時(shí)，透鏡的孔徑比較大，影響不顯著；但油鏡透鏡孔徑很小，射入鏡內(nèi)的光線(xiàn)很少，視野暗，物象模糊不清。如在玻片上加上折光率與玻片(n=1.52)相近的香柏油(n=l.515)，就可避免光線(xiàn)的分散，加強(qiáng)視野的亮度，獲得清晰的物象。
【材料與方法】
1．油鏡的識(shí)別
普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造(圖1-1)。觀察微生物標(biāo)本最常用的是油鏡，油鏡頭上標(biāo)有100×或125×，鏡頭前端有黑或白色的圓圈，刻有“HI”或“oil”等，其孔徑也較其他物鏡小。
圖1-1 普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造
2．油鏡的使用
(1) 對(duì)光：用低倍鏡對(duì)光調(diào)至視野最亮，要抬高聚光器，放大光圈。以天然光線(xiàn)為光源時(shí)，使用平面反光鏡；以燈光為光源時(shí)，使用凹面反光鏡。
(2) 將標(biāo)本固定在載物臺(tái)上，先用低倍鏡并找到標(biāo)本之適當(dāng)位置，然后換用油鏡。
(3) 在玻片上滴香柏油1～2滴。用眼從側(cè)方看著物鏡，緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，使物鏡頭浸于油滴內(nèi)，并幾乎與玻片接觸為止，但切勿使兩者相碰，防止損傷鏡頭或玻片。然后從目鏡觀察，仔細(xì)轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)節(jié)器，看到模糊物象時(shí)，再調(diào)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)器，使物象清晰。未能看到物象時(shí)，可重復(fù)上述操作。
(4) 觀察標(biāo)本時(shí)應(yīng)兩眼同時(shí)張開(kāi)，左眼觀察，右眼用于繪圖并記錄結(jié)果。
(5) 標(biāo)本觀察完畢，向上轉(zhuǎn)動(dòng)執(zhí)業(yè)藥師粗調(diào)節(jié)器將鏡筒提起，取下標(biāo)本，用擦鏡紙將鏡頭上的油擦凈。若油已醫(yī)學(xué)全.在線(xiàn)干，可用擦鏡紙沾少許二甲苯擦去油跡，隨即用擦鏡紙擦去二甲苯。
3．顯微鏡的保護(hù)
(1) 顯微鏡是貴重精密儀器，使用時(shí)要精心愛(ài)護(hù)，不得隨意拆散和碰撞。
(2) 取送顯微鏡時(shí)，應(yīng)右手持鏡臂，左手托鏡座，平端于胸前。
(3) 防止與強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、乙醚、氯仿、酒精等化學(xué)藥品接觸。
(4) 擦鏡頭時(shí)，應(yīng)順其直徑方向擦，不要轉(zhuǎn)圈擦。
(5) 不用時(shí)，將接物鏡轉(zhuǎn)開(kāi)呈八字，使其不正對(duì)聚光器。聚光器下降，罩上鏡套，對(duì)號(hào)歸位。
二、暗視野顯微鏡的使用方法
暗視野顯微鏡可在普通顯微鏡基礎(chǔ)上，換一個(gè)暗視野聚光器，聚光器中央有一個(gè)黑色擋光板，光線(xiàn)不能直接進(jìn)入鏡筒，而只能從擋光板周邊縫隙折射到載玻片的標(biāo)本上。經(jīng)反射作用而出聚光器，形成一個(gè)圓錐樣的光柱。調(diào)節(jié)聚光器之高低，可使此圓錐的頂點(diǎn)(即焦點(diǎn))恰在載物玻片的表面，此時(shí)如玻片上空無(wú)一物，或?yàn)橥耆该髦矬w，則光線(xiàn)直穿而過(guò)，不能進(jìn)入接物鏡中，因之視野呈黑色，如玻片上有可以折光的物體(如細(xì)菌或其他顆粒)存在，則由聚光器而來(lái)的光線(xiàn)遇此物體，形成一個(gè)彌散反射，其中有一部分光線(xiàn)即經(jīng)反射進(jìn)入鏡頭，到達(dá)觀察者的眼睛，此時(shí)所見(jiàn)者即為閃光的物體顆粒，襯托在黑色背景中，狀如夏夜睛空中的點(diǎn)點(diǎn)繁星，異常清晰。如光線(xiàn)斜射到螺旋體,由于菌體與周?chē)矬w折光率不同而引起光散射發(fā)出亮光，反射到接物鏡(圖1-2)。
圖1-2 暗視野顯微鏡光路原理示意圖
