生理學(xué)-實驗指導(dǎo):神經(jīng)干動作電位

1.制備坐骨神經(jīng)-腓神經(jīng)標(biāo)本（sciatic nerve- peroneal nerve specimen)
(1) 破壞腦、脊髓  取蛙一只，用自來水沖洗干凈。左手握蛙，用食指下壓頭部前端，拇指按壓背部，使頭前俯。右手持探針由頭端沿正中線向尾端觸劃，觸到凹陷處即枕骨大孔所在部位（圖 1)。將探針由此垂直刺入枕骨大孔，再將針折向前方插入bhskgw.cn/yaoshi/顱腔并左右搗毀腦組織，然后將針退出至刺入點皮下，針尖倒向后方，通過椎管搗毀脊髓。待四肢肌肉松弛，呼吸消失，表示腦和脊髓完全破壞，否則按上法重新?lián)v毀。

圖 1 破壞蛙腦、脊髓的方法

　　(2) 去除軀干上部和內(nèi)臟  在骶髂關(guān)節(jié)水平上0.5cm－1cm處剪斷脊柱，左手握住脊柱下方斷端，使頭與內(nèi)臟自然下垂，右手持粗剪刀，沿脊柱兩側(cè)剪除一切內(nèi)臟及頭胸部，留下后肢、骶骨、脊柱以及緊貼于脊柱兩側(cè)的坐骨神經(jīng)（圖 2)。

圖 2  剪除軀干上部和內(nèi)臟

　　(3) 剝皮  左手握緊脊柱斷端，右手捏住斷端邊緣皮膚，用力向下剝掉全部后肢的皮膚（圖 3)。把標(biāo)本放在盛有任氏液的燒杯中。洗凈雙手及用過的全部手術(shù)器械。再進行下面步驟。

圖 3  剝掉后背及后肢皮膚

　　(4) 分離兩腿   用鑷子夾住脊柱將標(biāo)本提起，背面朝上，剪去向上突起的尾骨。然后沿正中線用粗剪刀將脊柱和恥骨聯(lián)合中央剪開分為兩半（勿損傷神經(jīng))。將標(biāo)本浸入盛有任氏液的培養(yǎng)皿內(nèi)。
(5) 制作坐骨神經(jīng)-腓神經(jīng)標(biāo)本  取一腿放置蛙板中央，腹側(cè)向上用蛙釘固定。用玻璃分針沿脊柱側(cè)游離坐骨神經(jīng)，并于近脊柱端用任氏液浸泡過的棉線結(jié)扎。再將標(biāo)本背面朝上放置，剪去梨狀肌及其附近的結(jié)締組織。循坐骨神經(jīng)溝找出坐骨神經(jīng)大腿段，用玻璃分針小心剝離，然后從脊柱端將坐骨神經(jīng)剪斷，手持結(jié)扎線輕輕提起，剪斷坐骨神經(jīng)所有分支，游離神經(jīng)至腘窩處。坐骨神經(jīng)在腘窩上方分為脛神經(jīng)和腓神經(jīng)兩支。在分叉下剪斷內(nèi)側(cè)的脛神經(jīng)。沿腓腸肌溝分離腓神經(jīng)直至足部，用線結(jié)扎并剪斷。也可剪斷腓神經(jīng)而分離脛神經(jīng)，制備坐骨神經(jīng)-脛神經(jīng)標(biāo)本。將制備好的神經(jīng)標(biāo)本浸泡在任氏液中數(shù)分鐘，待其興奮性穩(wěn)定后開始實驗。
2. 標(biāo)本安裝和儀器連接
按圖 4所示用導(dǎo)線連接實驗儀器。在BL-420E系統(tǒng)刺激輸出端口上連接一對刺激電極，刺激電極的正極連接神經(jīng)干標(biāo)本盒的S1，負(fù)極連接S2，地線接地。兩對引導(dǎo)電極的正極分別連接在R1和R3上，負(fù)極分別連接在R2和R4上，引導(dǎo)電極的另一端分別連接在BL-420E系統(tǒng)的1、2通道。將標(biāo)本盒內(nèi)所有電極用浸有任氏液的棉球擦拭，從任氏液中取出坐骨神經(jīng)-腓神經(jīng)標(biāo)本，用濾紙吸去過多液體，置于標(biāo)本盒內(nèi)各電極上，粗的一端放在刺激電極上，細(xì)的一端放在記錄電極上。打開計算機，啟動BL-420E生物機能實驗系統(tǒng)。

圖 4  神經(jīng)干動作電位及其傳導(dǎo)速度測定裝置示意圖

　　3. 觀察項目
(1) 觀察不同刺激強度對神經(jīng)干動作電位的影響   由菜單選取“實驗項目-肌肉神經(jīng)實驗-神經(jīng)干動作電位的引導(dǎo)”。啟動刺激器，刺激強度從零開始逐漸增加，當(dāng)刺激強度增加到剛能引起微小動作電位時，此刺激強度稱為閾強度（threshold intensity)，記錄其數(shù)值。繼續(xù)增加刺激強度，觀察神經(jīng)干動作電位是否也相應(yīng)增加大。當(dāng)刺激強度引起的動作電位的幅值達最大時，再增加刺激強度，動作電位的幅值不再增加，該刺激強度稱為最大刺激強度，記錄其數(shù)值。
(2) 觀察雙向動作電位   ① 動作電位幅值不再增大時，記錄潛伏期（latency period)，從刺激偽跡到動作電位起始點的時間)、雙相動作電位上下相的幅度和整個動作電位持續(xù)的時間。 ② 將神經(jīng)干標(biāo)本放置方向倒換后，觀察動作電位的變化。 ③ 把引導(dǎo)電極R1和R2調(diào)換位置后，觀察動作電位的變化。
(3) 動作電位傳導(dǎo)速度的測定  點擊“實驗項目-肌肉神經(jīng)實驗-神經(jīng)干傳導(dǎo)速度的測定”，輸入R1與R3的距離（d)。選取1、2通道，調(diào)節(jié)各參數(shù)，使1、2通道的波形處于最佳。計算機會計算出兩個動作電位的潛伏期差值（t2-t1)。根據(jù)v=d/t2-t1，即可計算出神經(jīng)干動作電位的傳導(dǎo)速度。
(4) 觀察單向動作電位  在記錄電極R1、R2之間，用小鑷子夾傷神經(jīng)干或用藥物（如普魯卡因)阻斷，可見第一通道動作電位的第二相消失，變?yōu)閱蜗鄤幼麟娢�。第二通道的動作電位消失。記錄單相動作電位的潛伏期、持續(xù)時間和幅值。