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1 材料與方法
1.1 資料來源
收集1996年1月至2004年6月西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科術(shù)前均未經(jīng)放、化療或激素治療的子宮內(nèi)膜腺癌患者的石蠟包埋標(biāo)本42例，不典型增生子宮內(nèi)膜患者石蠟包埋標(biāo)本12例和正常子宮內(nèi)膜包埋標(biāo)本12例(增生期5例，分泌期4例，萎縮性子宮內(nèi)膜3例)。以上標(biāo)本均行常規(guī)病理學(xué)檢查及HE染色確診，實(shí)驗(yàn)過程中經(jīng)病理醫(yī)師復(fù)診。子宮內(nèi)膜腺癌臨床分期參照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO，1988)，組織學(xué)分級參照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO，1988)。42例子宮內(nèi)膜腺癌組織標(biāo)本中，臨床分期Ⅰ期18例，Ⅱ期12例，Ⅲ期11例，Ⅳ期1例;組織學(xué)分級Ⅰ級(高分化腺癌)12例，Ⅱ級(中分化腺癌)15例，Ⅲ級(低分化腺癌)15例;子宮內(nèi)膜腺癌均無宮體外轉(zhuǎn)移，限于內(nèi)膜層，無肌層浸潤10例，淺肌層浸潤(≤1/2肌層)18例，深肌層浸潤(>1/2肌層)14例(分別見表2、表3、表4);子宮內(nèi)膜腺癌患者年齡38～76歲，平均(58±6.1)歲。不典型增生子宮內(nèi)膜患者年齡44～67歲，平均(56±5.3)歲。正常子宮內(nèi)膜患者35～50歲，平均(42±4.2)歲。上述標(biāo)本均經(jīng)100g/L甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，5μm連續(xù)切片，分別做HE和EliVisionTM plus免疫組織化學(xué)染色。
1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
第一抗體試劑：①鼠抗人MMP-3單克隆抗體濃縮型，0.1mL，工作濃度1∶50，購于武漢博士德生物工程有限公司;②鼠抗人MMP-10單克隆抗體濃縮型，0.1mL，工作濃度1∶50，購于武漢博士德生物工程有限公司。第二抗體試劑：EliVisionTM plus鼠免疫組化試劑盒，購于福州邁新生物工程有限公司。顯色劑：DAB顯色劑，購于福州邁新生物工程有限公司醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站bhskgw.cn。
1.3 實(shí)驗(yàn)方法
采用EliVisionTM plus 二步法免疫組化染色檢測MMP-3、MMP-10在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)。陽性對照：用武漢博士德生物有限公司提供的MMP-3、 MMP-10陽性對照片作為陽性對照;陰性對照：用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。
1.4 結(jié)果判定
光學(xué)顯微鏡下，見腫瘤細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)明確的棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。MMP-3、MMP-10表達(dá)陽性和陰性，根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和染色細(xì)胞所占比例兩者積分之和來判斷。評分方法：觀察每例組織切片，隨機(jī)選擇5個高倍視野(10×40)，計數(shù)腫瘤細(xì)胞總數(shù)和陽性細(xì)胞個數(shù)，得出陽性細(xì)胞百分率。著色強(qiáng)度為多數(shù)陽性細(xì)胞呈現(xiàn)的染色計分。染色強(qiáng)度積分為：不染色=0，淡黃色=1，黃色=2，桔黃色=3，棕黃色=4;0～5%細(xì)胞染色=0，6%～50%細(xì)胞染色=1，>50%細(xì)胞染色=2。綜合評分：0～3分為陰性，4～6分為陽性。
1.5 統(tǒng)計學(xué)分析
采用χ2檢驗(yàn)，校正χ2檢驗(yàn)，確切概率法，3者之間比較采用Kruskal-wallis法檢驗(yàn)，3組之間兩兩比較采用Bonfferoni法檢驗(yàn)，以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義。
2 結(jié) 果
2.1 MMP-3、MMP-10在正常子宮內(nèi)膜、不典型增生子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達(dá)
MMP-3從正常子宮內(nèi)膜、不典型增生子宮內(nèi)膜至子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達(dá)呈現(xiàn)逐漸升高趨勢。正常子宮內(nèi)膜組與不典型增生子宮內(nèi)膜組之間比較，無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);正常子宮內(nèi)膜組與子宮內(nèi)膜腺癌組之間比較，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.000);不典型增生子宮內(nèi)膜組與子宮內(nèi)膜腺癌組之間比較，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.002，表1)。
MMP-10從正常子宮內(nèi)膜、不典型增生子宮內(nèi)膜至子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達(dá)呈現(xiàn)逐漸升高趨勢。正常子宮內(nèi)膜組與不典型增生子宮內(nèi)膜組之間比較，無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);正常子宮內(nèi)膜組與子宮內(nèi)膜腺癌組之間比較，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01);不典型增生子宮內(nèi)膜組與子宮內(nèi)膜腺癌組之間比較，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01，表1)表1 正常子宮內(nèi)膜、不典型增生子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜腺癌組織中MMP-3、MMP-10表達(dá)的比較(略)。
MMP-3在正常子宮內(nèi)膜及不典型增生子宮內(nèi)膜組織中僅表現(xiàn)為胞質(zhì)內(nèi)淺黃色淡染，而在子宮內(nèi)膜腺癌組織中大部分細(xì)胞質(zhì)呈強(qiáng)染色，呈深棕黃色(圖1)。MMP-10陽性表達(dá)主要定位在細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒狀。在正常子宮內(nèi)膜細(xì)胞大部分無著色或呈現(xiàn)細(xì)小均勻的淡黃色;在不典型增生子宮內(nèi)膜中陽性著色強(qiáng)度不一，多為淡黃色;而在子宮內(nèi)膜腺癌中的細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)多為陽性或強(qiáng)陽性著色，著色均勻或黃色顆粒布滿細(xì)胞質(zhì)(圖1)。
2.2 MMP-3、MMP-10與子宮內(nèi)膜腺癌組織學(xué)分級的關(guān)系
3組之間比較，采用Kruskal-walli法檢驗(yàn)，顯示MMP-3、MMP-10表達(dá)與子宮內(nèi)膜腺癌組織學(xué)分級有關(guān)，隨著腫瘤細(xì)胞分級升高，MMP-3、MMP-10表達(dá)有逐步升高趨勢(P<0.01，表2)。表2 MMP-3、MMP-10在子宮內(nèi)膜腺癌不同組織學(xué)分級中的表達(dá)(略)
2.3 MMP-3、MMP-10與子宮內(nèi)膜腺癌浸潤程度之間的關(guān)系
3組之間比較，采用Kruskal-walli法檢驗(yàn)，顯示MMP-3、MMP-10表達(dá)與子宮內(nèi)膜浸潤程度有關(guān)，隨著腫瘤細(xì)胞浸潤程度加深，MMP-3、MMP-10表達(dá)有升高趨勢(P<0.01，表3)。表3 MMP-3、MMP-10與子宮內(nèi)膜腺癌不同肌層浸潤程度中的表達(dá)(略)
2.4 MMP-3、MMP-10與子宮內(nèi)膜腺癌臨床分期之間的關(guān)系
3組之間比較，采用Kruskal-walli法檢驗(yàn)，顯示MMP-3、MMP-10表達(dá)與子宮內(nèi)膜腺癌臨床分期有關(guān)，隨著臨床分期增加，MMP-3、MMP-10的表達(dá)有逐步升高趨勢(P<0.01，表4)。表4 MMP-3、MMP-10在子宮內(nèi)膜腺癌不同臨床分期中的表達(dá)(略醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站bhskgw.cn)
2.5 子宮內(nèi)膜腺癌中MMP-3與MMP-10的相關(guān)性
結(jié)果顯示：MMP-3與MMP-10在子宮內(nèi)膜腺癌的檢測中具有明顯的相關(guān)性(表5)。表5 MMP-3與MMP-10的相關(guān)性(略)
2.6 聯(lián)合檢測MMP-3與MMP-10的陽性表達(dá)率
聯(lián)合檢測MMP-3與MMP-10，在子宮內(nèi)膜腺癌中總陽性表達(dá)率為88.1%(35/42)，明顯高于MMP-3單獨(dú)在子宮內(nèi)膜腺癌中的陽性表達(dá)率(P<0.05)，但與MMP-10在子宮內(nèi)膜腺癌中的陽性表達(dá)率無明顯差異(P>0.05，表6)。 表6 MMP-3和MMP-10聯(lián)合陽性表達(dá)率與單獨(dú)MMP-3、MMP-10的陽性表達(dá)率的比較(略)
3 討 論
侵襲與轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的主要生物學(xué)特征，ECM的降解主要依靠蛋白水解酶，是腫瘤侵襲正常組織和開始轉(zhuǎn)移的信號及重要途徑。MMPs是一類重要的細(xì)胞外基質(zhì)降解酶[2]，幾乎能降解ECM的所有成分。
