 |
 |
1 材料和方法
1.1 動物分組
33只雄性SD大鼠(南京醫(yī)科大學實驗中心提供)，體重200～250 g，隨機分為非燙傷正常參照組(正常組)、傳統(tǒng)TPN組(傳統(tǒng)組)和添加Ala-Gln的TPN組(二肽組)，每組11只。
1.2 中心靜脈置管
禁食24 h后，傳統(tǒng)組和二肽組大鼠稱重，2%氯氨酮(100 mg/kg)腹腔內注射麻醉后，以8%～10%硫化鈉水溶液脫去頸部、背部體毛，溫水擦凈，碘伏消毒皮膚，右頸部作縱形切口，顯露右側頸外靜脈，遠端結扎，近端插入外徑1.2 mm、內徑0.6 mm的硅膠管至上腔靜脈(插入1.0～2.0 cm)。硅膠管自皮下隧道從背部肩胛間皮下引出后接保護彈簧及自制旋轉裝置。正常組不置管。
1.3 燙傷模型制作和飼養(yǎng)
根據公式S=0.091×W2/3〔S為體表面積(m2)、W為大鼠體重(kg)〕計算出大鼠體表面積，在大鼠仍處于麻醉狀態(tài)下，將傳統(tǒng)組和二肽組大鼠已行脫毛處理的背部浸入100℃水中12 s，造成30%體表面積的Ⅲ度燙傷。傷后立即按體重腹腔內注射林格液(2.5 ml·100 g-1)，置入代謝籠，自中心靜脈置管用微量注射泵持續(xù)注林格液(11.25 ml·100 g-1)抗休克治療。正常組不做燙傷處理，置入籠中自由飲食。飼養(yǎng)室內溫度保持在25℃左右，每天保持約12 h光照，紫外線消毒室內空氣每天1次，乙醇擦洗代謝籠以保持代謝籠清潔;每天碘伏消毒燙傷創(chuàng)面和手術切口。
1.4 營養(yǎng)支持
傳統(tǒng)組和二肽組大鼠接受等熱量等氮量TPN：熱量780 kJ·kg-1體重，采用葡萄糖和脂肪乳劑(30%英特利匹特，華瑞公司生產)雙能源3∶2比例提供。每千克體重氮量1.8 g：傳統(tǒng)組氮源由8.5%樂凡命(華瑞公司生產)供給，二肽組氮源由8.5%樂凡命中添加Ala-Gln(費森尤斯公司生產的20%力肽，其中力肽提供的氮量占總氮量的48%)。非蛋白熱量：氮量=434 kJ∶1 g。2組TPN液中均加入適量的水溶性、脂溶性維生素、微量元素、電解質以及胰島素(按每10 g葡萄糖1 U給予)。TPN液配方見表1。自中心靜脈插管用微量注射泵均勻持續(xù)輸注TPN液，燙傷當日每天每100 g體重給予11.25 ml，第2～7天每天每100 g體重給予22.5 ml。表1 傳統(tǒng)組和二肽組TPN營養(yǎng)液配方(略)
1.5 標本收集與檢測醫(yī).學全.在.線網站bhskgw.cn
第8天晨處死動物，取標本檢測各觀察指標。
1.5.1 體重變化醫(yī).學全.在.線網站bhskgw.cn
第8天大鼠稱重，觀察TPN前后的體重變化情況。
1.5.2 血生化檢查
腹主動脈穿刺取血，置入干燥管中，血凝后離心20 min (1500 r·min-1)，取上清-20℃冷凍保存，采用全自動生化分析儀檢測血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(G)，采用免疫濁度法檢測前白蛋白(PAB)、轉鐵蛋白(TRF)。
1.5.3 肌肉組織中Gln含量的測定
取大腿肌肉一塊，立即液氮冷凍，移入-80℃深低溫水箱保存，集中用高效液相色譜法測定肌肉中Gln的含量[1]。
1.5.4 氮平衡和累積氮平衡測定
收集大鼠24 h尿液，微量凱氏定氮法檢測24 h尿液中氮量。氮平衡(g·kg-1)=〔入氮(g)-出氮(g)〕/體重(kg)。TPN時，入氮即營養(yǎng)液中氨基酸的含氮量，出氮主要為24 h尿液中的氮量。第n天的累積氮平衡=第1～n天的氮平衡的累加。
1.5.5 空腸黏膜形態(tài)學觀察
距Treitz韌帶8 cm處取一段空腸，10%甲醛溶液固定，常規(guī)病理切片，于光鏡下用多媒體彩色病理圖文分析系統(tǒng)測量絨毛高度(VH)、絨毛寬度(VW)、隱窩深度及黏膜厚度，根據公式VSA=л×VW×VH計算出絨毛表面積(VSA)，每張切片隨機測量5個絨毛，取平均值。
1.5.6 創(chuàng)面肉芽組織的觀察
取背部燙傷皮膚一塊，10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片、蘇木精-伊紅染色、樹脂封片，光鏡下觀察肉芽組織中毛細血管和成纖維細胞的密度，每張切片高倍鏡觀察至少8個不同的視野，對毛細血管和成纖維細胞進行計數，取平均值。
1.6 統(tǒng)計學處理
全部數據采用±s表示，應用SPSS 10.0軟件包進行數據處理，采用t檢驗進行差異比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
2 結 果
