醫(yī)學(xué)免費(fèi)論文:細(xì)胞間黏附分子1在紅霉素抗炎機(jī)制中的作用

醫(yī)學(xué)免費(fèi)論文:細(xì)胞間黏附分子1在紅霉素抗炎機(jī)制中的作用

【摘要】  目的 從分子水平上探討紅霉素(EM)的抗炎作用機(jī)制。方法 體外培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞(16HBE)，將細(xì)胞隨機(jī)分為8組，先加入EM干預(yù)，后加入腫瘤壞死因子α(TNF�拨�)刺激。分組如下：①空白對(duì)照組;②TNF�拨�(20 ng/ml,16 h)組;③EM(0.3 μg/ml，24 h)+TNF�拨�(20 ng/ml，16 h)組;④EM(3 μg/ml，24 h)+TNF�拨�(20 ng/ml，16 h)組;⑤EM(30 μg/ml，24 h)+TNF�拨�(20 ng/ml，16 h)組;⑥EM(0.3 μg/ml，48 h)+TNF�拨�(20 ng/ml，16 h)組;⑦EM(3 μg/ml，48 h)+TNF�拨�(20 ng/ml，16 h)組;⑧EM(30 μg/ml，48 h)+TNF�拨�(20 ng/ml，16 h)。然后收集各組細(xì)胞分別提取RNA，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT�睵CR)方法檢測(cè)細(xì)胞間黏附分子��1(ICAM��1) mRNA的表達(dá)。因ICAM��1 RT�睵CR產(chǎn)物分子大小約為700 bp，與原設(shè)計(jì)產(chǎn)物分子大小490 bp不相符，進(jìn)一步作基因克隆測(cè)序了解基因之間是否具有同源性。結(jié)果 ICAM��1的RT�睵CR產(chǎn)物即為目的基因：ICAM��1基因。TNF�拨链碳と酥�氣管上皮細(xì)胞(16HBE)后，細(xì)胞ICAM��1mRNA表達(dá)增高。先加入不同濃度及作用時(shí)間的EM，后加入TNF�拨链碳と酥�氣管上皮細(xì)胞(16HBE)，各組細(xì)胞ICAM��1mRNA表達(dá)均降低，且提示有濃度與時(shí)間依賴性。結(jié)論 TNF�拨聊芗せ钊酥�氣管上皮細(xì)胞使其ICAM��1基因表達(dá)增高，促進(jìn)炎癥的發(fā)生發(fā)展。EM能抑制人支氣管上皮細(xì)胞ICAM��1基因表達(dá)，可能是EM的抗炎作用機(jī)制之一。

【關(guān)鍵詞】  人支氣管上皮細(xì)胞;細(xì)胞間黏附分子��1;腫瘤壞死因子α;紅霉素

Expression of intercellular adhesion molecule 1 mRNA in the anti�瞚nflammatory molecular mechanism of erythromycin醫(yī).學(xué).全.在.線bhskgw.cn

LI Mei�睭ua, ZHONG Xiao�睳ing, LIU Guang�睳an,et al.

Department of Resperatory, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi, China

【Abstract】 Objective To investigate the anti�瞚nflammatory molecular mechanism of erythromycin (EM) in order to find a new way to prevent and treat chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Methods Human bronchial epithelial cell line 16HBE was cultured with 10% serum DMEM (high glucose). The cells were randomly divided into eight groups: blank control group, TNF�拨� (20 ng/ml,16 h), EM(0.3 μg/ml，24 h)+TNF�拨� (20 ng/ml，16 h), EM(3 μg/ml，24 h)+TNF�拨� (20 ng/ml，16 h), EM(30 μg/ml，24 h)+TNF�拨�(20 ng/ml，16 h), EM(0.3 μg/ml，48 h)+TNF�拨� (20 ng/ml，16 h), EM(3 μg/ml，48 h)+TNF�拨�(20 ng/ml，16 h), and EM(30 μg/ml，48 h)+TNF�拨� (20 ng/ml，16 h). Then total cellular RNA was extracted to detect the expression of ICAM��1 mRNA by RT�睵CR. The molecular size of ICAM��1 RT�睵CR production was not correspondent for what it was designed，therefore，clone sequencing was applied to confirm it. Results ICAM��1 RT�睵CR production was ICAM��1 mRNA. ICAM��1mRNA was increased by the addition of TNF�拨�,which was inhibited by the preincubation with EM in dose�瞕ependent and time�瞕ependent fasion. Conclusions ICAM��1mRNA can be increased by the stimulation of TNF�拨�, which indicate that EM modify inflammation presumably by suppressing ICAM��1mRNA in human bronchial epithelial cells.

【Key words】 Human bronchial epithelial cells;ICAM��1;TNF�拨�;Erythromycin

　 長(zhǎng)期應(yīng)用小劑量紅霉素(EM)治療慢性氣道感染性疾病〔彌漫性泛細(xì)支氣管炎、支氣管哮喘、支氣管擴(kuò)張、慢性阻塞性肺病等(COPD)〕取得良好的效果已經(jīng)得到臨床資料證實(shí)〔1～4〕。研究發(fā)現(xiàn)，這種療效與EM抗菌活性無(wú)關(guān)，而與EM的抗炎活性密切相關(guān)〔5，6〕。EM在體內(nèi)外對(duì)許多致炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生均有調(diào)節(jié)作用，但是，EM抗炎作用機(jī)制仍不清楚。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)研究EM對(duì)ICAM��1基因表達(dá)的影響，從分子水平上探討EM的抗炎作用機(jī)制，為臨床防治老年慢性阻塞性肺病提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料 高糖(DMEM)培養(yǎng)基為Hyclone公司產(chǎn)品，胎牛血清為杭州四季青生物工程材料有限公司產(chǎn)品，腫瘤壞死因子(TNF�拨�)系Sigma公司產(chǎn)品，EM系A(chǔ)mresco公司產(chǎn)品�？俁NA提取試劑Trizol購(gòu)自Invitrogen公司，AMV逆轉(zhuǎn)錄酶和dNTPs購(gòu)自美國(guó)Promega公司，TaqDNA聚合酶購(gòu)自TAKARA公司，DEPC系美國(guó)Serva公司產(chǎn)品，瓊脂糖購(gòu)自上海生工生物工程公司。瓊脂糖凝膠回收試劑盒及pGEMT�瞖asy試劑盒(含T4 DNA連接酶)系Q�瞓iogene公司產(chǎn)品。常規(guī)試劑：異丙醇、乙醇、氯仿、Tris粉、EDTA等系國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭�。OligodT15，β�瞐ctin引物：上游5′�睺GACGGTCAGGTCATCACTATCGGCAATGA��3′，下游5′�睺TGATCTTCATGGTG(AGC) TAGGAGCGAGGGCA ��3′，由上海生工生物工程公司合成。ICAM��1引物：上游5′�睞GGTGGCCGGCCAGCTTATA��3′，下游5′�睠CTGTCCCGGGATAGGTTCA��3′，由北京奧科生物技術(shù)有限責(zé)任公司合成。

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