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1.2 試劑甲醇為色譜純，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。
1.3 試藥
1.3.1 胡蘆巴 經(jīng)成都中醫(yī)藥大學中藥標本中心盧先明教授鑒定，均為豆科植物胡蘆巴Trigonella foenumgraecum L.的干燥成熟種子。夏季果實成熟時采割植株，曬干，打下種子，除去雜質(zhì)。符合《中國藥典》2005年版一部167頁胡蘆巴藥材項下有關(guān)規(guī)定。藥材來源與購買地信息具體(見表1)。表1 胡蘆巴HPLC指紋圖譜研究藥材樣品
1.3.2 鹽胡蘆巴 取凈胡蘆巴飲片1 kg，加規(guī)定量的鹽水400 ml拌勻后，置密閉的容器內(nèi)悶潤2 h，置設(shè)定的溫度200 ℃下炒炙炒約35 min，每分鐘翻炒30次，取出，放涼。每100 kg藥材用食鹽2 kg.
2 方法學研究
2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應性實驗
2.1.1 色譜條件色譜柱 DiamonsilC18(250 mm×4.6 mm，5 μm)柱;流動相：乙腈水與乙腈的比例,0～25 min為10%～21%，25～60 min為21%～34%，60 min停止。檢測波長：211 nm;流速：1.0 ml/min;柱溫：35 ℃;進樣量：20 μl.
2.1.2 供試品溶液的制備 精密稱取胡蘆巴(鹽胡蘆巴)粉末1 g，分別置于50 ml具塞三角瓶中，分別加入10 ml 70%甲醇，密塞，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，稱定重量，用70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液3 ml，置10 ml容量瓶中，用70%甲醇定容，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過,作為供試品溶液。
2.2 方法學考察
2.2.1 精密度考察 取同一供試品(1號樣品)溶液，連續(xù)進樣5次，以考察儀器的精密度。測得各共有峰的峰面積的RSD小于3%，結(jié)果表明儀器和整個系統(tǒng)的精密度良好醫(yī).學.全.在.線bhskgw.cn。
2.2.2 穩(wěn)定性考察 取同一份供試品(1號樣品)溶液，分別在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h這5個時間點進行檢測，以考察樣品的穩(wěn)定性。測得各共有峰的峰面積的RSD小于3%，結(jié)果表明供試品在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
2.2.3 重復性考察 取同一批號(1號樣品)的供試品5份，按照供試品溶液的制備和檢測方法進行檢測，測得各共有峰的峰面積的RSD小于3%，結(jié)果表明本方法的重現(xiàn)性良好。
2.3 樣品測定
2.3.1 胡蘆巴生品HPLC指紋圖譜測定[5] 生品胡蘆巴共有10個樣，對應的高效液相圖譜疊加圖見圖1.
2.3.2 胡蘆巴鹽炙品HPLC指紋圖譜測定 鹽胡蘆巴共有10個樣品，對應的高效液相圖譜疊加圖見圖2.
2.3.3 相似度評價 將所得HPLC指紋普圖,選取1號樣品作為代表性樣品，以其色譜作為代表性指紋圖譜，其他樣品與之比較，將其原始測試數(shù)據(jù)輸入指紋圖譜相似度評價軟件中經(jīng)計算產(chǎn)生的相似度。胡蘆巴生品相似度評價結(jié)果見表2，胡蘆巴鹽炙品相似度評價結(jié)果見表3.表2 10批胡蘆巴生品相似度評價結(jié)果表3 10批胡蘆巴鹽炙品相似度評價結(jié)果可見大部分樣品圖譜的共性特征基本吻合，相互之間的相似度較高，均在0.90以上，符合《中藥注射劑指紋圖譜技術(shù)指南》要求(0.9～1.0)。
