香連丸—小檗堿和巴馬亭的測(cè)定—薄層掃描法

本方法采用薄層-導(dǎo)數(shù)熒光分光光度法測(cè)定小檗堿和巴馬亭的含量。

本方法適用于中成藥香連丸的測(cè)定。

供試品置索氏提取器中加乙醇提取至無(wú)色并定容到一定體積。提取液于硅膠G板上點(diǎn)樣，并刮斑于具塞離心玻璃管中，經(jīng)處理后取上清液于熒光計(jì)上測(cè)定，小檗堿的λ_EX(nm)：355； λ_Em(nm)：509，513，560，564。巴馬亭的λ_EX(nm)：344； λ_Em(nm)：495，499，565，569。計(jì)算含量。

1. 正丁醇，冰醋酸，水，三乙胺

2. 乙醇

1儀器

1.1多功能熒光計(jì)

1.2紫外分析儀

1.3索氏提取器

2材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

1.供試品溶液的制備

香連丸、木香、黃連粉碎，恒重，并同時(shí)炮制制黃連。精稱(chēng)上述藥品，置索氏提取器中，90%乙醇提取至無(wú)色，并定容到5mL備用。

2.對(duì)照品溶液的制備

精密吸取小檗堿標(biāo)準(zhǔn)乙醇液（1.0mg/mL)，巴馬亭標(biāo)準(zhǔn)乙醇液（1.0mg/mL)點(diǎn)板，展開(kāi)，定斑，刮斑于具塞離心試管中，加無(wú)水乙醇5mL，超聲振蕩2h，離心15min，得上清液作為對(duì)照品溶液。

注1：“精密稱(chēng)取”系指稱(chēng)取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱(chēng)取重量的千分之一，“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

注2：“水分測(cè)定“用烘干法。取供試品2-5g，平鋪于干燥至恒重的扁形稱(chēng)量瓶中，厚度不超過(guò)5mm，疏松樣品不超過(guò)10mm，精密稱(chēng)定，打開(kāi)瓶蓋在100-105℃干燥5小時(shí)，將瓶蓋蓋好，移至干燥器中，冷卻30分鐘，精密稱(chēng)定重量，再在上述溫度干燥1小時(shí)，冷卻，稱(chēng)重，至連續(xù)兩次稱(chēng)重的差異不超過(guò)5mg為止根據(jù)減失的重量，計(jì)算供試品中含有水分的百分?jǐn)?shù)。

1.薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無(wú)麻點(diǎn)、無(wú)氣泡、無(wú)破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2.薄層板的處理

正丁醇每升用2gNaOH、1gAgNO₃回流重蒸，冰醋酸重蒸處理，水為重蒸水。用上述處理過(guò)的正丁醇-冰醋酸-水（7：1：2)跑空板（未點(diǎn)樣的薄層板)；跑到頂端后取出晾干，105℃活化30min。

3.點(diǎn)樣

3.1對(duì)照品點(diǎn)樣 （沒(méi)有具體量)

精密吸取對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線(xiàn)距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

3.2供試品點(diǎn)樣

精密吸取供試品溶液和對(duì)照品溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線(xiàn)距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

4展開(kāi)

將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開(kāi)缸的展開(kāi)劑中，以正丁醇-冰醋酸-水-三乙胺（7：1：2：1)展開(kāi)，展開(kāi)至8～15cm時(shí)，取出薄層板，晾干，在2537A紫外分析儀上觀察熒光。

5含量測(cè)定

5.1標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制

將對(duì)照品的硅膠G板，展開(kāi)后的斑點(diǎn)，刮于具塞離心玻璃管中，取經(jīng)處理后上清液于熒光計(jì)上測(cè)定，小檗堿的λ_EX(nm)：355； λ_Em(nm)：509，513，560，564。巴馬亭的λ_EX(nm)：344； λ_Em(nm)：495，499，565，569。以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)分別繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

5.2供試品的測(cè)定

將供試品的硅膠G板，展開(kāi)后的斑點(diǎn)，刮于具塞離心玻璃管中，取經(jīng)處理后上清液于熒光計(jì)上測(cè)定，小檗堿的λ_EX(nm)：355； λ_Em(nm)：509，513，560，564。巴馬亭的λ_EX(nm)：344； λ_Em(nm)：495，499，565，569，計(jì)算含量。

注：分光光度法應(yīng)以配制供試品的同批溶劑為對(duì)照，采用1cm的石英吸收池。以吸收度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)，一般供試品的吸收度讀數(shù)，以在0.3-0.7之間的誤差較小。儀器的狹縫波帶寬度應(yīng)小于供試品吸收帶的半寬度，否則測(cè)得的吸收度偏低。狹縫寬度的選擇，應(yīng)以減少狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為準(zhǔn)。由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，因此測(cè)定供試品的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計(jì)算含量。

陶美英，趙金慧. 薄層-導(dǎo)數(shù)熒光分光光度法測(cè)定香連丸、左金丸中小檗堿、巴馬亭的含量. 中草藥，1997，28（5)：278-280