公開(公告)號
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CN1242049C
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公開(公告)日
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2006.02.15
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申請(專利)號
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CN01129780.8
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申請日期
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2001.10.18
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專利名稱
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一種生產(chǎn)抗癌藥物工程菌的發(fā)酵方法
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主分類號
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C12N1/20(2006.01)I
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分類號
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C12N1/20(2006.01)I;A61K35/74(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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暨南大學(xué)
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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王一飛;張美英;錢垂文;李久香
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地址
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510632廣東省廣州市暨南大學(xué)生物醫(yī)藥研究開發(fā)基地
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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廣州市紅荔專利代理有限公司
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代理人
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劉興耿
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國省代碼
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廣東;44
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主權(quán)項(xiàng)
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一種生產(chǎn)抗癌藥物工程菌即DH5a-pBVnm23-H1的發(fā)酵方法,其特征是:A.按配制10L發(fā)酵液,發(fā)酵培養(yǎng)基配方重量百分比如下:酵母提取物(Yeastextract)0.30~3.0蛋白胨(Typtone)0.30~3.0氯化鈉(Nacl)0.5~1.5葡萄糖(Glucose)0.30~5.0微量元素適量B.發(fā)酵工藝(1)菌種的加入量菌種的接種量為培養(yǎng)基溶液的5~15%,菌種的光密度為1~3;(2)工程菌生長和誘導(dǎo)表達(dá)的時(shí)間及溫度工程菌發(fā)酵過程中,長菌溫度為28~35℃,時(shí)間2~5小時(shí),誘導(dǎo)表達(dá)的溫度為39~45℃,時(shí)間3~7小時(shí):(3)加糖時(shí)刻及方式選擇加糖方式采取慢速加糖方式,加糖量為100~350g,且在0.5~3小時(shí)加完;(4)發(fā)酵液酸堿度調(diào)節(jié)采用酸堿自動(dòng)平衡調(diào)節(jié)pH值,使pH值維持在6.5~7.5之間;(5)溶氧水平通過通氣量與轉(zhuǎn)速自動(dòng)調(diào)節(jié)溶氧,維持在40%以上水平。
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摘要
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本發(fā)明是一種生產(chǎn)抗癌藥物工程菌即DH5a-pBVnm23-H1的發(fā)酵方法研究。該法包括如下步驟:發(fā)酵培養(yǎng)基配方篩選和發(fā)酵工藝條件選定。配方包括酵母提取物、蛋白胨、葡萄糖等組成,發(fā)酵工藝包括菌種的加入量及其最佳生長時(shí)期,工程菌生長和誘導(dǎo)表達(dá)的時(shí)間及溫度、加糖時(shí)刻及方式選擇,發(fā)酵液酸堿度的調(diào)節(jié)等。用本發(fā)明培養(yǎng)基配方及所建立的發(fā)酵工藝進(jìn)行DH5a-pBVnm23-H1的發(fā)酵,具有菌體得率高、目標(biāo)蛋白表達(dá)量高、時(shí)間短、成本低等特點(diǎn)。
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國際公布
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