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一種新的重組人干擾素α2b的分離純化方法

公開(公告)號 CN1749274A  
公開(公告)日 2006.03.22  
申請(專利)號 CN200510080478.0  
申請日期 2005.07.05  
專利名稱 一種新的重組人干擾素α2b的分離純化方法  
主分類號 C07K14/56(2006.01)I  
分類號 C07K14/56(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(專利權(quán))人 北京凱因生物技術(shù)有限公司  
發(fā)明(設(shè)計)人 張春麗  
地址 100176北京市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)榮京東街6號  
頒證日  
國際申請  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu)  
代理人  
國省代碼 北京;11  
主權(quán)項(xiàng) 一種新的重組人干擾素α2b的分離純化方法,其包括下述步驟: (1)破碎發(fā)酵完畢的重組人干擾素α2b大腸桿菌工程菌,離心得沉淀; (2)將沉淀按1∶5-20(重量/體積)比例加入4M尿素/TE溶液,離心得沉淀; (3)將沉淀按1∶5-25(重量/體積)比例加入Tris-HCl溶液,離心得沉淀; (4)將沉淀按1∶2-10(重量/體積)加入8M鹽酸胍+DTT裂解液,離心,取上清液,測蛋白含量; (5)將上清液倒入H3BO3溶液中攪拌均勻,稀釋后的溶液蛋白含量為0.15-0.08mg/ml,復(fù)性,得復(fù)性液; (6)向復(fù)性液中緩慢滴加6MHCl,調(diào)PH2.0-3.0,離心,收集上清液,緩慢滴加6MNaOH(體積/體積),調(diào)PH7.8-8.0; (7)將硫酸銨粉末緩慢加入上清液中,溶解后過濾,取濾液; (8)依次進(jìn)行疏水柱M1柱層析、CM-Sepharose柱層析、疏水柱M2柱層析和S-100分子篩層析。  
摘要 本發(fā)明涉及一種新的重組人干擾素α2b的分離純化方法,其包括下述步驟:破碎重組人干擾素α2b大腸桿菌工程菌,尿素溶解,Tris-HCl洗滌,鹽酸胍裂解,硼酸復(fù)性,調(diào)pH值,鹽溶,疏水柱M 1柱層析,CM-Sepharose柱層析,疏水柱M2柱層析和S-100分子篩層析。本方法減少了純化步驟,進(jìn)行純化過程的集成,使工藝流程順暢,無迂回,生產(chǎn)配置無瓶頸,為大規(guī)模自動化生產(chǎn)的再放大提供了可能。  
國際公布  
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