| 公開(公告)號 | CN1233826C |
| 公開(公告)日 | 2005.12.28 |
| 申請(專利)號 | CN02108141.7 |
| 申請日期 | 2002.03.27 |
| 專利名稱 | 一種重組畢赤酵母乳糖酶及其應(yīng)用 |
| 主分類號 | C12N9/38 |
| 分類號 | C12N9/38;C12N15/56;//(C12N9/38,C12R1:85) |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 范云六;姚 斌;張 偉;趙 軍 |
| 地址 | 100081北京市中關(guān)村南大街12號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 姜兆元 |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項 | 一種發(fā)酵生產(chǎn)乳糖酶的方法，包括以下步驟：a.將含有乳糖酶編碼基因的重組酵母菌株接種培養(yǎng)，然后按5～10％接種量再接種于含3～5％葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基10×Basalsalts中；b.通氣攪拌培養(yǎng)，在整個培養(yǎng)過程中氧飽和度不低于20％；c.14～24小時后，按照12～24mL/hr/L的流量流動加入18～35％的葡萄糖溶液繼續(xù)培養(yǎng)2～8小時；d.按照2～8mL/hr/L的流量流動加入18～35％葡糖糖∶甲醇＝2～6∶1～4混合溶液，繼續(xù)培養(yǎng)2～8小時；e.加入誘導(dǎo)劑甲醇，使甲醇的終濃度維持在0.1～0.5％，繼續(xù)培養(yǎng)至少5小時；其中，所述乳糖酶編碼基因基于下述核苷酸序列：1ATGAAGCTCCTCTCTGTTGCTGCTGTTGCCTTGCTGGCGGCACAGGCAGCGGGTGCTTCCATCAAGCATCGTCTCAATGGCTTCACGATC91CTGGAACATCCGGATCCGGCGAAAAGAGACTTGCTGCAAGACATTGTATGTCGTCATCAAATCTGAATCACTAGCTATGCTCCATAGTGA181TTATGTAAACATACTGACCCTCTGCAGGTTACATGGGATGACAAATCTCTGTTCATCAATGGAGAGAGGATTATGTTATTCAGCGGAGAA271GCATCCTTTCAGGTACACTAGCCCCGCGTACTTCTATGGTTTAATTCTGATGAAAACAGATTGCCAGTACCTTCGCTTTGGCTTGATA361TTCCACAAGATCAGAGCTCTTGGTTTCAACTGTGTATCTTTCTATATTGATTGGGCTCTTCTGGAGGGAAAGCCTGGCGACTACAGAG452GAAGGCATCTTTGCTCTGGAACCCTTCTTCGATGCAGCCAAGGAAGCAGGCATTTATCTGATCGCCCGCCCCGGTTCGTACATCAATG541CCGAGGTCTCAGGCGGTGGCTTCCCTGGATGGTTGCAGAGGGTCAATGGCACTCTTCGCTCGTCTGATGAGCCATTCCTTAAAGCTACTG631AAGTATGGGCTCATTGATGAGCTACTTCAGACACTTGCTTACAGTGTGATTTTAGCTATATCGCCAATGCCGCTGCTGCCGTGGCGAA721GGCTCAAATCACGAATGGAGGGCCAGTAATTCTCTACCAGCCCGAAAACGAATACAGCGGTGGCTGCTGCGGTGTCAAATACCCCGATGC811AGACTACATGCAGTATGTTATGGATCAGGCCCGGAAGGCTGACATTGTTGTACCTTTCATCAGCAACGATGCCTCACCTTCTGGGCACAA901TGCTCCTGGAAGTGGAACGGGCGCTGTTGATATTTATGGTCACGATAGCTATCCGTAAGTTATTCTGCATATGAGCTCCTTTCTTTTAGA991GATTTTCCGTTTGACGGCAACTGACATTTACCTAGCCTTGGCTTTGATTGCGTATGTTCTATCCTGCGAGCGAGATTGAATACTTCTGAC1081GTATATAGGCAAACCCATCCGTATGGCCCGAGGGTAAACTGCCCGACAACTTCCGCACGCTCCATCTTGAGCAGAGCCCATCAACTCCGT1171ATTCACTTCTTGAGGTAAGTTACTACTCAGCCTCGAGGACTAGTAATGTGTCTCACTGTCTTTTAGTTCCAAGCGGGTGCTTTCGACCCA1261TGGGGTGGACCCGGCTTTGAAAAATGCTATGCCCTCGTTAACCACGAATTCTCGAGAGTTTTCTATAGGAACGACTTGAGTTTCGGAGTT1351TCTACCTTTAACTTATACATGGTATGGTCTATTCATATCTCTGGAACATACATCGCGCTGACAATATATAGACTTTCGGCGGAACAAACT1441GGGGTAACCTCGGACATCCCGGTGGATATACATCCTACGACTACGGCTCGCCTATAACTGAAACGCGAAACGTTACACGGGAGAAGTACA1531GCGACATAAAGCTCCTTGCCAACTTTGTCAAAGCATCGCCATCCTATCTCACCGCTACTCCCAGAAACCTGACTACTGGTGTTTACACAG1621ACACATCTGACCTGGCTGTCACCCCGTTAATGGGTGATAGTCCAGGCTCATTCTTCGTGGTCAGACATACGGACTATTCCAGCCAAGAGT1711CAACCTCGTACAAACTTAAGCTTCCTACCAGTGCTGGTAACCTGACTATTCCCCAGCTGGAGGGCACTCTAAGTCTCAACGGACGTGACT1801CAAAAATTCATGTTGTTGATTATAATGTGTCTGGAACGAACATTATCTATTCGACAGCTGAAGTCTTCACCTGGAAGAAGTTTGACGGTA1891ACAAGGTCCTGGTGTTATACGGCGGACCGAAGGAACACCATGAATTGGCCATTGCCTCCAAGTCAAATGTGACCATCATCGAAGGTTCGG1981ACTCTGGAATTGTCTCAACGAGGAAGGGCAGCTCTGTTATCATTGGCTGGGATGTCTCTTCTACTCGTCGCATCGTTCAAGTCGGTGACT2071TGAGAGTGTTCCTGCTTGGTAAGTGAATTCACAAGAAACTCGCGTTCACGACTAATGAATCCACAGATAGAAACTCTGCTTACAACTACT2161GGGTCCCCGAACTCCCCACAGAAGGTACTTCTCCCGGGTTCAGCACTTCGAAGACGACCGCCTCCTCCATTATTGTGAAGGCCGGCTACC2251TCCTCCGAGGGGCTCACCTGGATGGTGCTGATCTTCATCTTACTGCTGATTTCAATGCCACCACCCCGATTGAAGTGATCGGTGCTCCAA2341CAGGCGCCAAGAATCTGTTCGTGAATGGTGAAAAGGCTAGCCACACAGTCGACAAAAACGGCATCTGGAGCAGTGAGGTCAAGTACGCGG2431CTCCAGAGATCAAGCTCCCCGGTTTGAAGGATTTGGACTGGAAGTATCTGGACACGCTTCCCGAAATTAAGTCTTCCTATGATGACTCGG2521CCTGGGTTTCGGCAGACCTTCCAAAGACAAAGAACACTCACCGTCCTCTTGACACACCAACATCGCTATACTCCTCTGACTATGGCTTCC2611ACACTGGCTACCTGATCTACAGGGGTCACTTCGTTGCCAACGGCAAGGAAAGCGAATTTTTTATTCGCACACAAGGCGGTAGCGCATTCG2701GAAGTTCCGTATGGCTGAACGAGACGTATCTGGGCTCTTGGACTGGTGCCGATTATGCGATGGACGGTAACTCTACCTACAAGCTATCTC2791AGCTGGAGTCGGGCAAGAATTACGTCATCACTGTGGTTATTGATAACCTGGGTCTCGACGAGAATTGGACGGTCGGCGAGGAAACCATGA2881AGAATCCTCGTGGTATTCTTAGCTACAAGCTGAGCGGACAAGACGCCAGCGCAATCACCTGGAAGCTCACTGGTAACCTCGGAGGAGAAG2971ACTACCAGGATAAGGTTAGAGGACCTCTCAACGAAGGTGGACTGTACGCAGAGCGCCAGGGCTTCCATCAGCCTCAGCCTCCAAGCGAAT3061CCTGGGAGTCGGGCAGTCCCCTTGAAGGCCTGTCGAAGCCGGGTATCGGATTCTACACTGCCCAGTTCGACCTTGACCTCCCGAAGGGCT3151GGGATGTGCCGCTGTACTTCAACTTTGGCAACAACACCCAGGCGGCTCGGGCCCAGCTCTACGTCAACGGTTACCAGTATGGCAAGTTCA3241CTGGAAACGTTGGGCCACAGACCAGCTTCCCTGTTCCCGAAGGGATCCTGAACTACCGCGGAACCAACTATGTGGCACTGAGTCTTTGGG3331CATTGGAGTCGGACGGTGCTAAGCTGGGTAGCTTCGAACTGTCCT |
| 摘要 | 本發(fā)明包括一種性質(zhì)優(yōu)良的乳糖酶其編碼基因的克隆、高效表達乳糖酶的重組畢赤酵母的構(gòu)建以及重組酵母的高密度發(fā)酵大量產(chǎn)生乳糖酶的方法。重組酵母中乳糖酶的表達量可達到6mg/mL發(fā)酵液。高效表達乳糖酶的重組酵母可用來大規(guī)模工業(yè)化廉價生產(chǎn)乳糖酶。 |
| 國際公布 |
