一種高效篩選目的蛋白的表達(dá)載體,其制備方法及用途
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公開(公告)號
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CN1657628A
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公開(公告)日
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2005.08.24
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申請(專利)號
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CN200410039594.3
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申請日期
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2004.02.19
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專利名稱
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一種高效篩選目的蛋白的表達(dá)載體，其制備方法及用途
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主分類號
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C12N15/64
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分類號
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C12N15/64;C12N15/31;C12N15/67;C12N15/62
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所
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發(fā)明(設(shè)計)人
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陳立勇;解志剛;郭寧;沈倍奮
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地址
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100850北京市海淀區(qū)太平路27號
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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代理人
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國省代碼
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北京;11
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主權(quán)項
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一種真核表達(dá)載體，其特征在于該載體是含有anti-erbB2-scFv-Fc與IL-2基因的融合基因及新霉素抗性基因突變體的雙順反子表達(dá)載體。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種高效篩選目的蛋白的表達(dá)載體，其制備方法及用途。發(fā)明人通過在含有CMV啟動子和dhfr擴(kuò)增系統(tǒng)的真核表達(dá)載體中引入一個內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點，將anti-erbB2-scFv-Fc基因與IL-2的融合基因與新霉素抗性基因連接。利用PCR方法對Neo基因進(jìn)行點突變，構(gòu)建成表達(dá)載體pCMV-HFI-mNeo。本載體特點在于通過引入IRES使融合蛋白基因和Neo基因在同一個啟動子啟動下共表達(dá)；通過對Neo基因的點突變?nèi)趸疦eo基因表達(dá)產(chǎn)物活性，從而提高了陽性表達(dá)克隆的篩選效率，大大減少了篩選工作量，獲得了目的基因的穩(wěn)定高效表達(dá)克隆。
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國際公布
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