公開(公告)號(hào)
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CN1206361C
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公開(公告)日
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2005.06.15
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN99119038.6
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申請(qǐng)日期
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1999.09.10
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專利名稱
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系列通用型腺病毒伴隨病毒載體的構(gòu)建及用途
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主分類號(hào)
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C12N15/861
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分類號(hào)
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C12N15/861;C12N7/01;C12N15/33;C12N15/79;C12N15/65;A61K48/00
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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本元正陽基因技術(shù)股份有限公司
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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吳小兵;侯云德;伍志堅(jiān);曹暉
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地址
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100176 北京市北京經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)永昌中路 6 號(hào)
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頒證日
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國際申請(qǐng)
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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代理人
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國省代碼
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北京;11
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主權(quán)項(xiàng)
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保藏編號(hào)為CGMCCNO.0415.1的大腸埃希氏菌DH5α/pWAV-1攜帶的載體質(zhì)粒pWAV-1,含有2型AAV(AAV-2)基因組兩端的ITR,在兩個(gè)ITR之間依次為巨細(xì)胞病毒立早增強(qiáng)子和啟動(dòng)子、多克隆位點(diǎn)和polyA信號(hào),所述的pWAV-1多克隆位點(diǎn)包括NheI,XhoI,PstI和BamHI。
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摘要
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本發(fā)明涉及一系列通用型腺病毒伴隨病毒(adeno-associated virus,AAV)載體的構(gòu)建,這些載體包括pWAV-1、pWAV-2、pSNAV-1和pSNAV-2。其共同特征是每種載體均提供2型AAV兩端的ITR、巨細(xì)胞病毒(CMV)立早增強(qiáng)子和啟動(dòng)子、多克隆位點(diǎn)和poly A信號(hào)。本發(fā)明提供了用上述通用型AAV載體構(gòu)建攜帶外源基因的AAV載體質(zhì)粒的方法。含有外源基因的AAV載體質(zhì)粒既可用于產(chǎn)生重組AAV,又可直接作為真核表達(dá)質(zhì)粒使用。pSNAV-1和pSNAV-2除具有上述共同特征外,還含有新霉素抗性基因表達(dá)盒。本發(fā)明利用這一特征,提供了用含有外源基因的pSNAV-1或pSNAV-2質(zhì)粒建立穩(wěn)定攜帶AAV載體的細(xì)胞株的方法。本發(fā)明進(jìn)一步提供了“一株載體細(xì)胞/一株輔助病毒”的重組AAV生產(chǎn)方法,即用我們先前發(fā)明的一種用于重組AAV大規(guī)模生產(chǎn)的全功能輔助病毒(已申報(bào)專利,申請(qǐng)?zhí)?8120033.8)感染AAV載體細(xì)胞株,實(shí)現(xiàn)重組AAV的大規(guī)模生產(chǎn)。
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國際公布
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