| 公開(公告)號 | CN1544656A |
| 公開(公告)日 | 2004.11.10 |
| 申請(專利)號 | CN200310111382.7 |
| 申請日期 | 2003.11.14 |
| 專利名稱 | 人呼吸道合胞病毒熒光定量PCR試劑盒及其檢測方法 |
| 主分類號 | C12Q1/68 |
| 分類號 | C12Q1/68;G01N33/52 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 武漢大學(xué);武漢市兒童醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 張楚瑜;張其威;游上游 |
| 地址 | 430072湖北省武漢市武昌珞珈山 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 武漢宇晨專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 王敏鋒 |
| 國省代碼 | 湖北;42 |
| 主權(quán)項 | 一種人呼吸道合胞病毒熒光定量PCR試劑盒，其特征是該試劑盒包括：(a)RNA提取液，使用Trizol一步法；(b)逆轉(zhuǎn)錄酶M-MLV，使用濃度為10-1000U每個反應(yīng)體系；(c)RNA酶抑制劑，使用濃度為10-100U每個反應(yīng)體系；(d)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液，使用的引物P1為：5’TTAGCAAAGTCAAGTTGAATGAT3’，使用濃度為0.1-10umol/L，還包括有RT5×buffer溶液，dNTPs溶液，使用的濃度為0.1-10mmol/L和無菌雙蒸水；(e)標(biāo)準(zhǔn)陽性模板，含有人呼吸道合胞病毒核衣殼N蛋白基因3’端195個堿基片段SEQIDNO.1與PGEM-TEasy載體構(gòu)成的PGEMT195重組質(zhì)粒；(f)HotstartTaqDNA聚合酶，使用濃度為1-10U每個反應(yīng)體系；(g)熒光定量PCR反應(yīng)液；(h)標(biāo)準(zhǔn)陰性參控液，即無模板熒光定量反應(yīng)液，由(f)和(g)組成。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種人呼吸道合胞病毒(Human Respiratory Syncytial Virus，HRSV)熒光定量PCR試劑盒及其檢測方法，該試劑盒包括RNA提取液、逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶抑制劑、逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)液、標(biāo)準(zhǔn)陽性模板、Taq DNA聚合酶、熒光定量反應(yīng)液和標(biāo)準(zhǔn)陰性參控液。利用該試劑盒，首先提取待測樣品中病毒總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后與標(biāo)準(zhǔn)陽性模板一起作熒光定量PCR，根據(jù)熒光定量PCR儀器所帶的軟件計算出待測樣品中呼吸道合胞病毒的起始濃度。本發(fā)明檢測速度快，操作方便安全，省時效率高，可有效的對嬰幼兒及成人病毒性呼吸道感染患者進(jìn)行病毒RNA的檢測，從而達(dá)到了早期診斷和有效預(yù)防呼吸道合胞病毒感染。 |
| 國際公布 |
