一種篩選人組織相容性抗原(HLA)的T細(xì)胞表面抗原肽的體系,及其在制備MHC-抗原肽多聚體中的應(yīng)用
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公開(公告)號
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CN1511958A
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公開(公告)日
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2004.07.14
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申請(專利)號
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CN02159974.2
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申請日期
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2002.12.31
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專利名稱
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一種篩選人組織相容性抗原(HLA)的T細(xì)胞表面抗原肽的體系,及其在制備MHC-抗原肽多聚體中的應(yīng)用
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主分類號
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C12Q1/68
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分類號
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C12Q1/68;G01N33/68;C07K14/435;C07K14/47;A61K38/17;A61P37/06
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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王小寧
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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徐小寧;王小寧
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地址
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510630廣東省廣州市天河北路599號1801
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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代理人
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國省代碼
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廣東;44
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主權(quán)項(xiàng)
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一種篩選人組織相容性抗原(HLA)的T細(xì)胞表面抗原肽的方法，其包括以下步驟：(1)用iRNA技術(shù)制備表達(dá)不同HLA抗原(包括I類和II類抗原)的、內(nèi)源性抗原肽提呈表達(dá)缺陷的T2樣細(xì)胞系；(2)制備人主要及次要組織相容性抗原的肽鏈基因庫；(3)利用步驟(2)制備的基因庫，制備噬菌體肽展示體系；(4)把步驟(1)制備的T2樣細(xì)胞系與步驟(3)制備的噬菌體混合；(5)洗滌去除不結(jié)合的噬菌體；(6)利用抗噬菌體衣殼蛋白抗體檢測噬菌體結(jié)合的情況和條件；(7)用洗脫液進(jìn)行梯度洗脫去除親和性不高的噬菌體；(8)加入噬菌體敏感宿主大腸桿菌使T2樣細(xì)胞上的噬菌體感染大腸桿菌，并得以擴(kuò)增；(9)由大腸桿菌中進(jìn)一步分離噬菌體質(zhì)粒，并對其中的cDNA克隆測序、篩選出與MHC分子結(jié)合的肽段序列；(10)合成所篩選的肽段，結(jié)合至T2樣細(xì)胞用該細(xì)胞刺激T細(xì)胞反應(yīng)，確認(rèn)肽段T細(xì)胞表位活性。
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摘要
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本發(fā)明屬生物醫(yī)藥領(lǐng)域，是關(guān)于一種篩選人組織相容性抗原(HLA)的T細(xì)胞表面抗原肽的體系，及其在制備MHC-抗原肽多聚體中的應(yīng)用。利用該組抗原肽制備的MHC-肽四聚體(MHC tetramer)可用于同種移植排斥反應(yīng)的監(jiān)測，并指導(dǎo)臨床合理使用免疫抑制劑。
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國際公布
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