| 公開(公告)號 | CN1990044A |
| 公開(公告)日 | 2007.07.04 |
| 申請(專利)號 | CN200510112381.3 |
| 申請日期 | 2005.12.30 |
| 專利名稱 | 人體免疫活性細(xì)胞DCCIK抗腫瘤細(xì)胞制劑的制備方法及應(yīng)用 |
| 主分類號 | A61K45/00(2006.01)I |
| 分類號 | A61K45/00(2006.01)I;A61K35/14(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I;C12N5/08(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 上海中科英達(dá)生物技術(shù)有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 劉祥麟;王定華 |
| 地址 | 200031上海市岳陽路320號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海新天專利代理有限公司 |
| 代理人 | 王 巍 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種人體免疫活性細(xì)胞DCCIK抗腫瘤細(xì)胞制劑，其特征在于該制劑是通過下列方法制得的， (1)外周血單個(gè)核細(xì)胞PBMC的制備 無菌條件下用血分器取腫瘤患者抗凝外周血，用生理鹽水對倍稀釋后，用淋巴細(xì)胞分離液Ficoll，1.077，離心2000rpm×25’，分離得PBMC，再用Hanks液洗滌2次，鏡下計(jì)細(xì)胞數(shù)，最后用無血清培養(yǎng)液AIM-V調(diào)節(jié)細(xì)胞密度使成4×106/ml細(xì)胞懸液； (2)非粘附與粘附細(xì)胞分離 將細(xì)胞懸液移入6孔板Nuclon，37℃，5％CO2，培養(yǎng)2-6h，然后用移液管輕輕沖吸細(xì)胞，將非粘附細(xì)胞懸液收集在離心管中作誘導(dǎo)CIK細(xì)胞備用，粘附細(xì)胞就留在6孔板上，加入DC培養(yǎng)液3ml/孔待用； (3)非粘附CIK細(xì)胞的誘導(dǎo)和擴(kuò)增 把離心管中的非粘附細(xì)胞懸液接種到含有IFN-γ1000U/ml AIM-V培養(yǎng)液的25cm2培養(yǎng)瓶，100ml/瓶，置37℃，5％CO2培箱中24-36h后，把用Hanks液配制的抗CD3單抗5μg/ml包被25cm2培養(yǎng)瓶，同時(shí)加入終濃度IL-1β 100U/ml AIM-V，IL-2300U/mlAIM-V繼續(xù)培養(yǎng)48-72h，鏡下計(jì)數(shù)，用CIK培養(yǎng)液調(diào)細(xì)胞密度為4×105/ml，每隔48h按上述相同條件擴(kuò)增1次，培養(yǎng)至第5-7天即收集CIK細(xì)胞備用； 抗CD3單抗包被方法：在AIM-V培液中加入抗CD3單抗，使成為抗CD3單抗?jié)舛葹?～10μg/ml的包被液，在25cm2培瓶中加入5ml包被液，4℃過夜或者37℃溫育2h后，棄去全部包被液即可； (4)粘附DC細(xì)胞的誘導(dǎo)和擴(kuò)增 在留有粘附細(xì)胞的6孔板上，每孔添加DC培液3ml內(nèi)含有GM-CSF 800U/ml和IL-4500U/ml，于37℃，5％CO2培養(yǎng)2天后，在各孔添加α-Galcer 100ng/ml或CI(200ng/ml)，每天加1次，共3次，連續(xù)刺激3天后，于第5-7天收集細(xì)胞備用； (5)DC與CIK 1∶5混合共培養(yǎng)制取DCCIK細(xì)胞 取培養(yǎng)至第5-7天之DC和CIK細(xì)胞，計(jì)數(shù)，離心，分別收集DC和CIK細(xì)胞，用AIM-V無血清培液調(diào)兩細(xì)胞的密度分別為2×105和1×106，按DC∶CIK＝1∶5等體積混合后移入25cm2培養(yǎng)瓶10ml/瓶，于37℃，5％CO2培養(yǎng)，每隔48-72h按以上細(xì)胞密度分瓶擴(kuò)大培養(yǎng)1次，經(jīng)5次擴(kuò)大培養(yǎng)后即可獲5×109～1×1010的DCCIK細(xì)胞； (6)DCCIK細(xì)胞制劑 離心收集1～5×109細(xì)胞，用0.9％氯化鈉注射液洗滌2次，離心，棄上清，將細(xì)胞移至250ml輸液瓶中，加2g人血清白蛋白和250ml 0.9％氯化鈉注射液，制成細(xì)胞懸液制劑。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了人體免疫活性細(xì)胞(DCCIK)抗腫瘤細(xì)胞制劑及制備方法。該方法用有關(guān)細(xì)胞因子對取自患者外周血分別誘導(dǎo)成DC與CIK，在應(yīng)用α-Galcer或CI對DC反復(fù)沖擊后與CIK細(xì)胞按比例作混合共培養(yǎng)，即獲DCCIK細(xì)胞。與同源CIK比較，其增殖活性和細(xì)胞毒活性均有較大提高。該DCCIK為未經(jīng)相關(guān)腫瘤抗原沖擊而對同源腫瘤具有特異靶向和高效廣譜殺瘤作用。可有效防止腫瘤術(shù)后和放化療后的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。在與其他療法配合下，可延長患者生存期并改善生活質(zhì)量。 |
| 國際公布 |
